[01052599]登革病毒CTL表位疫苗免疫效应的研究

登革病毒(Dengue virus, DV)为黄病毒属单股正链RNA病毒，包括4种血清型(D1V，D2V，D3V和D4V)。DV的基因组共编码3种结构蛋白(C，PrM/M和E)和7种非结构蛋白(NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5)。DV感染可引起轻度的登革热(DF)及致死性疾病登革出血热(DHF)/登革休克综合症(DSS)。WHO估计全球每年约有5000万-1亿DF患者，其中包括大约25万-50万DHF/DSS病例。大量研究表明：DV特异性抗体不但不能保护机体反而通过ADE效应增强DV感染，而DV特异性细胞毒性T细胞(CTL，活化的CD8+ T细胞)在保护性免疫中发挥作用。通过T细胞表位预测软件SYFPEITHI和RANKpep预测，该研究合成了12条D1V特异性潜在受HLA-A2限制的候选CTL表位[NS4b(40-48)TLYAVATTI，E(256-264)QEGAMHTAL，NS3(205-213)LPAIVREAI，NS5(210-218)SRNSTHEMY，NS3(207-215)AIVREAIKR，NS4a(56-64)MLLALIAVL，C(46-54)LVMAFIAFL，NS4a(140-148)ALLFMILTV，NS2a(144-152)QLWATLLSL，NS5(762-770)LLATSIFKL，NS2a(169-177)AMILSIVSL和NS5(134-142)LLMRTTWAL]。MHC-肽复合物稳定性实验证实4条候选表位[NS4b(40-48)，NS4a(140-148)，NS2a(144-152)和NS5(134-142)]与HLA-A2分子具有高结合力；酶联免疫斑点实验(ELISPOT)，细胞内细胞因子染色(ICS)和CTL杀伤实验证实上述4条候选表位可刺激HLA-A2阳性外周血单个核细胞(PBMC)产生表位特异性CTL；ELISPOT和ICS结果显示4条候选表位免疫的HLA-A2转基因小鼠PBMC、脾细胞和淋巴结细胞中存在表位特异性CTL；DV攻击4条候选表位免疫的小鼠后，RT-PCR和病毒空斑实验结果显示血中有低水平DV滴度。该项目鉴定的4条HLA-A2限制性CTL表位在D1V中高度保守，并且HLA-A2在不同种族人群中具有极高的百分率(>30%)。因此，此4条CTL表位具有潜在的应用价值，如，可同其它CTL表位串联成具有广泛人群覆盖率的通用型CTL表位肽疫苗，也可用于研发MHC-肽四聚体，用于快速检测DV感染及DV候选疫苗免疫效应评估，从而产生较好的社会和经济效应。在该项目资助下，项目负责人以第1作者或通讯作者身份在SCI期刊《Journal of Medical Virology. 2010，82(4):642-648. IF:2.6》、《Virology Journal.2012；9:259. IF:2.5》及中文核心期刊《中华微生物学和免疫学杂志.2009，29(1):41-45.》、《中华微生物学和免疫学杂志.2009，29(9):822-826.》、《中国免疫学杂志.2009，25(5):392-396.》、《中华传染病杂志.2010，28(11):651-655.》、《临床血液学杂志，2009,22(2):70-72.》、《温州医学院学报.2009，39(6):546-550.》、《温州医学院学报.2011，41(6):523-526.》发表9篇研究论文，申请发明专利1项(申请号：200910053050.5)。基于该研究的实验基础，项目负责人2010年申请到了1项国家自然科学基金面上项目(名称：登革病毒通用型Th-CTL表位肽嵌合疫苗研制和免疫学效应研究，编号:31070143)。通过该项目研究，课题组建立了稳定的快速鉴定病原体特异性T细胞表位的平台并积累了丰富的实践经验，参与该研究项目的研究生也得到了学习和锻炼。