[01117633]降解黄曲霉毒素枯草芽孢杆菌的研究及在养猪生产中的应用

黄曲霉毒素（AFT）是由黄曲霉和寄生曲霉产生的具有强烈毒性的次级代谢产物。目前动物饲料受到霉菌毒素的污染所带来的危害越来越受到养殖业的关注,而且霉菌毒素所产生的免疫抑制更使动物容易感染其他病原体,从而危害养殖业的发展。 目前,抑制霉菌毒素的方法有物理和化学去毒方法,但这些方法存在效果不稳定、营养成分损失大、影响饲料适口性,且难以规模化生产等缺点而不能被广泛应用到实际生产中。微生态制剂是用于肠道微生态调整的微生物产品,对改善畜禽肠道微生态平衡,增强动物免疫力,提高生产性能等方面具有良好的促进作用。由于芽孢杆菌在不利环境中能够产生孢子,抗逆性强,能够耐受饲料加工过程中的高温、高湿,以及胃内的酸性环境和肠道上段的胆盐和消化液,在到达肠道下段以后萌发粘附,在饲料加工、储存及消化道中保持高复活率。本研究从健康动物肠道中分离出一株芽孢杆菌,能够耐酸、耐胆盐、耐高温、同时还发现其具有抑制黄曲霉菌生长的特性,经16s rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,由于其可竞争性抑制病原微生物粘附到肠黏膜上皮细胞上,同病原微生物争夺有限的营养物质、竞争粘附位点,并可以产生抑菌物质,抑制病原微生物的生长繁殖。将该株枯草芽孢杆菌进行大量培养,加入到饲料中,对于断奶仔猪具有提高日增重、降低腹泻率、提高机体免疫力的作用,对于商品育肥猪具有提高日粮中营养物质的消化率、减少粪便中氨气含量等作用,结果表明该株枯草芽孢杆菌具有提高动物消化率、提高日增重、提高机体内免疫球蛋白含量、降低腹泻率、减少猪粪中氨气的排放、能够降解黄曲霉毒素等作用,可将该株枯草芽孢杆菌应用于养殖场,给养殖户提供菌种、培养基和简易发酵罐,可将发酵场搬到养殖场,减少运输、包装费用和避免二次污染的机会,该株枯草芽孢杆菌对于临床应用具有广阔的市场应用前景。 1.主要研究结果 1)从健康动物肠道中分离出一株芽孢杆菌,能够耐酸、耐胆盐和耐高温,对大肠杆菌、沙门氏菌有显著的抑制活性,而对金黄色葡萄球菌抑制作用差。该株芽孢杆菌培养上清液对黄曲霉生长具有明显抑制作用,菌悬液、超声波菌体并无明显抑菌作用。培养上清液对AFB1、AFG1和AFM1的降解活性高,黄曲霉毒素降解的活性组分存在于发酵上清液中,菌悬液和胞内液对黄曲霉毒素无降解率性,该芽孢杆菌经16s rDNA鉴定为枯草芽孢杆菌。 2)将降解黄曲霉毒素枯草芽孢杆菌加入到断奶仔猪饲料中15d之后,平均日采食量可提高8g,总体日增重43.22g,料重比降低0.4,提高猪对饲料的消化率;可提高断奶仔猪血清中免疫球蛋白IgG含量、IgA含量,而IgM 的含量差异不显著;能显著降低猪的腹泻率和腹泻指数;血液指标谷氨酰转肽酶和碱性磷酸酶指标明显提高,差异显著。 3)将枯草芽孢杆菌制剂应用于生长肥育猪,可提高猪对日粮粗蛋白和干物质的消化率;降低猪粪中氨气的产生量;参考我国及其他一些国家对霉菌毒素症状的标准,结合猪临床表现上的差异,进行黄曲霉菌毒素中毒症状的评分,可减少育肥猪黄曲霉毒素中毒的比例。 4)将该株枯草芽孢杆菌制剂的培养基、菌种提供给养猪场,在猪场建设简易小型发酵罐,直接在猪场进行枯草芽孢杆菌的发酵,等于将发酵场搬到了养猪场,减少了包装、运输费用和二次污染的可能性,对养殖场来说实用性非常强,值得大力推广应用。 2.本研究筛选出来的降解黄曲霉毒素枯草芽孢杆菌分别在汝南县百汇联盈养猪专业合作社、驻马店驿城区顺河乡办事处罗庄村委养殖场、汝南县万佳丰养殖专业合作社等开展了成果转化与推广,近一年的实践结果表明,该株枯草芽孢杆菌能够提高猪的消化率、提高免疫球蛋白含量、降低腹泻率、减少粪便中氨气的排放和降解黄曲霉毒素的作用,经济、社会和生态效益显著。 3.项目实施过程中,发表论文5篇。针对项目成果,在驻马店、汝南等多个猪场进行试验,根据试验结果,可减少猪场免疫抑制相关疾病的发生,降低养殖成本,降解黄曲霉毒素,为促进养猪业的健康发展提供了技术保障。 4.成果主要创新点 （1）筛选出一株能够抑制黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌,同时该株枯草芽孢杆菌能够提高猪的消化率、降低腹泻率、提高猪体内免疫球蛋白含量等作用。 （2）该株枯草芽孢杆菌能够降低猪粪中氨气的排放量和减少猪黄曲霉毒素发生的比例,对于低碳减排、绿色环保、生物安全具有重要作用。 （3）创造性提出将发酵场搬到养猪场的设想,对于解决猪场的一系列疾病、降低养殖成本、解决当前黄曲霉毒素的危害具有重要作用。