[01120112]EB病毒LMP2 CTL/B细胞重叠表位的筛选及其抗肿瘤免疫效应研究

现已证明EB病毒（EBV）感染与中国南方高发的鼻咽癌（NPC）等疾病相关,目前临床缺乏针对NPC等早期或者手术后有效的免疫治疗方案,传统的放疗、化疗对机体造成身心伤害,还存在肿瘤细胞复发和转移的风险,因此鼻咽癌综合治疗越来越注重免疫治疗。EBV潜伏膜蛋白2（LMP2）维持EBV潜伏感染,是静止B细胞中唯一可检测到的EBV潜伏期基因表达产物,被认为是免疫治疗的理想靶抗原,其序列相对保守,并具有潜在的CTL细胞表位,在清除肿瘤细胞中起着关键的作用。 蛋白质抗原是通过表位体现其特异性,在免疫应答中只有抗原分子表面的B细胞表位和T细胞表位,分别被B、T 细胞表面的BCR（B细胞抗原识别受体）和TCR（T细胞抗原识别受体）所识别,从而诱导出高度特异性的体液免疫和细胞免疫,产生免疫效应,表位的筛选已然成为加快疫苗开发周期的一个重要研究领域。研究显示：大多数NPC等EBV相关肿瘤患者体内可以产生针对LMP2表位有效的保护性CTL免疫应答,同时B淋巴细胞作为免疫系统中抗体产生细胞,同T淋巴细胞共同组成了特异性免疫防线,B细胞介导的体液免疫反应,发挥着中和、调理和ADCC（抗体依赖细胞介导的细胞毒）等作用。因而细胞免疫和体液免疫协同效应是控制肿瘤免疫防治的有效手段。 本研究利用生物信息学技术,预测EBV-LMP2优势B细胞表位及MHC-Ⅰ限制性的CTL表位,重组构建了EBV-LMP2免疫优势T、B细胞重叠表位分子组合,选择HPV L1为重叠表位分子的抗原载体,分析了其体内外的免疫学效应。实验结果证实：优势T、B细胞表位具有相应免疫特性,重叠的T、B细胞多表位可在体外真核细胞中表达目标表位蛋白,表达产物具有免疫反应性;重叠多表位免疫动物体内可产生EBV特异性的抗体,嵌合的HPV L1/EBV-LMP2多表位免疫组特异性抗体产生水平显著高于其他免疫组,显示了其显著的载体优势效应,免疫小鼠脾淋巴细胞显示了较好的肽特异杀伤靶细胞功能,但嵌合的HPV L1/EBV-LMP2多表位免疫组比较EBV-LMP2多表位免疫组CTL杀伤效应无显著性差异,说明病毒样颗粒为表位载体在体液免疫方面优势效应明显,具有开发为表位疫苗载体的应用潜能。本研究成果为开发EBV感染相关肿瘤的免疫防治提供了研究新思路和研究新方向。