[01123170]稻曲病菌毒素分离纯化与抗体制备

用稻曲病菌菌核，在PSA培养基26℃条件下，可分离稻曲病菌，且较容易获得成功。纯化后的稻曲病菌用PD或PS培养基培养均可获得大量的培养滤液。生物学测定研究发现用100％甲醇溶液能基本提取培养滤液中的粗毒素，提取效果比较好，小麦胚根胚芽生长抑制实验表明，稻曲病菌粗毒素对胚根的抑制作用明显高于对胚芽抑制作用。实验结果表明活性物质能溶于甲醇，并能被提取出来。用培养滤液和粗提毒素水溶液作活性测定，发现100％甲醇提取后的粗毒素液对胚根胚芽的抑制作用与培养滤液原液的抑制作用相差不大，说明粗提液中保留了主要的毒素成份。ELISA检测结果表明，用戊二醛偶联的Ustiloxin A—BSA制备的抗血清效价较高，说明Ustiloxin A与BSA已偶联上，并成功地制备了达到免疫标记与免疫学检测基本要求的抗血清。通过免疫细胞化学标记，研究认为稻曲病菌在固体和液体培养基中均能产生毒素。在超微水平上观察了采自田间稻曲球内外部的结构，发现外层主要是稻曲病菌的无性阶段，即厚垣孢子，里面是致密的菌丝，且厚垣孢子及菌丝中都有大量的脂肪粒存在。通过免疫标记发现，稻曲球内部的菌丝中标有大量的胶体金，说明茵丝中存在毒素，但是厚垣孢子没有标上胶体金，说明厚垣孢子中没有毒素。创新(特色)与应用：毒素Ustiloxin A的分于量较小，通过与载体蛋白BSA偶联后作为完全抗原免疫兔子。并且用间接ELISA检测效价时将Ustiloxin A与另一载体蛋白OA偶联成Ustiloxin A—OA，作为检测效价的抗原，成功地制备了达到免疫标记与免疫学检测基本要求的抗血清。目前国内外对毒素的研究，多侧重于对人畜毒性的研究，而对毒素在病原菌致病过程中的作用和毒素对水稻毒性的研究较少，对于毒素在稻曲病形成的过程中是否起作用还不明确。因此为了揭示稻曲病毒素的在稻曲病形成过程中的作用及其作用机制，选取了含量最大、活性最强的Ustiloxin A制备成多克隆抗体，通过细胞化学的方法，研究稻曲病毒素UstiloxinA的分泌行为、作用方式从而揭示稻曲病毒素的作用机制。