[01127713]重组前列腺分泌蛋白PSP94的分泌型表达

前列腺上皮细胞合成分泌的含有94个氨基酸的蛋白，即PSP94，同前列腺酸性磷酸酶（PAP）和前列腺特异性抗原（PSA）一样，可作为诊断前列腺癌，尤其是雄激素非依赖性前列腺癌的生物指标。血清前列腺特异性抗原（PSA）的前列腺癌人群筛查虽然已经被许多国家接受，但这种检查方法的特异性较差，为了更好地区分良性前列腺增生和前列腺癌，需要探索出新的标志物，PSP94正是候选标志之一。前列腺癌是雄激素敏感性癌，但用激素去除疗法后，会逐渐丧失其敏感性，转为非敏感性癌，而且就诊患者多为晚期，手术治疗效果也不好，因此目前急需寻找一种新的前列腺癌治疗方法。许多研究表明，PSP94蛋白可在体内外实验中抑制前列腺癌细胞的生长，是治疗前列腺癌的极有价值的潜在生物制剂，因此PSP94在治疗和监测前列腺癌进展方面具有良好的应用前景。该课题通过大量实验，取得了以下成果：1．从中国人正常前列腺组织中钓取了编码PSP94蛋白的cDNA序列，测序表明与国外报道的序列相同。2．以白喉毒素的信号肽序列为基础，巧妙设计了分泌表达重组PSP94蛋白的信号肽序列，将信号肽与PSP94编码基因的连接位点放在信号肽序列内部，使得重组蛋白前分子分泌到细菌周质空间后信号肽被完全切除，仅仅保留与天然蛋白一级序列完全相同的重组蛋白。3．构建了人PSP94的重组分泌型表达质粒，该质粒可以将重组PSP94蛋白分泌到细菌周质空间中，不影响细菌本身的生长，分泌到周质空间的重组蛋白经透析和半透膜离心粗纯后纯度可达到93%。4．重组分泌型PSP94的体外实验表明，它可以抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖并诱导其凋亡。本项成果主要是利用设计巧妙的信号肽序列，构建了重组人PSP94蛋白的原核分泌型表达体系，并对表达到细菌周质空间中的蛋白进行了纯化，验证了其生物学活性。这项成果为寻找一种行之有效的前列腺癌生物治疗方法奠定了坚实的基础，重组PSP94的开发和应用将为前列腺癌提供一种新的生物制剂，特别是有可能用于激素非依赖前列腺癌的防治。我们课题组对长春市16,500余名50岁以上男性进行了前列腺癌集团普查，前列腺癌的发现率超过1.7%，这个发现率大大超出了中国是前列腺癌低发国家的设想，说明目前前列腺癌在我国的发病率已经不低。因此重组PSP94一旦开发成药，对于前列腺癌的诊断和治疗都有极大的医用价值。同时此项成果一旦完成，其社会经济效益是十分明显的，具有十分广阔的应用前景。