[01138078]囊胚培养联合玻璃化冷冻提高体外受精-胚胎移植临床妊娠率的基础与临床研究

【课题来源与背景】 常规体外受精—胚胎移植技术经过20多年的发展和改善,从技术上解决了不孕不育等长期困惑的医学难题,然而体外受精—胚胎移植常规治疗中,为了提高妊娠率,实行多胚胎移植已是惯例,但导致多胎妊娠率明显增加,增加患者及社会的经济负担,因此目前提高临床妊娠率及降低多胎妊娠率的问题依然是世界各国生殖工作者共同面临的挑战。 研究表明,在胚胎的体外培养过程中发现,4～8细胞期胚胎发育存在阻滞现象,当胚胎没有发育潜能或携带异常的染色体和基因时,在培养至囊胚期的过程中可因自身发育异常被自然筛选掉,只有质量好的胚胎才能发育至囊胚期,通过移植囊胚期胚胎,使得胚胎发育更接近生殖生理的自然环境,移植至宫腔后更接近内膜的开窗期,减少母胎相互间的某些不利因素的影响,具有较高的着床和妊娠潜力。因此,囊胚移植能够显著提高胚胎种植率及临床妊娠率。然而只有不断优化囊胚体外培养体系及逐渐成熟囊胚冷冻技术才能使得囊胚移植作为常规移植技术成为可能。本研究利用分子生物学手段鉴定胚胎早期发育关键的分子,同时摸索改善囊胚培养最适合的操作环境,为减少早期胚胎发育阻滞、提高囊胚形成率提高新的思路及理论依据。同时我们引进Cryotop作为载体的玻璃化冷冻技术,利用小鼠胚胎建立玻璃化冷冻方案,并在此基础上,逐步完善形成稳定的人囊胚玻璃化冷冻体系。本研究将囊胚培养及玻璃化冷冻技术联合应用,通过囊胚培养筛选出最优质的胚胎,选择在内膜条件最好的情况下进行同步移植,以提高种植率及妊娠率。对于促排周期中发现内膜形态不好、HCG日孕酮水平明显升高、雌激素水平很高及卵巢过度刺激（OHSS）患者,选择囊胚玻璃化冷冻,择期行冻融胚胎移植,可以避免胚胎的浪费,同时明显提高周期的妊娠率,有效降低患者的医疗费用。 【创新点】 1. 首次运用蛋白质组学技术成功鉴定小鼠MII卵母细胞中600余种母源蛋白,为后期研究植入前胚胎早期发育机制提供候选基因; 2. 首次报道了RING box protein1、PCBP1、Pik3cd、cofilin1、WDR82等基因在小鼠卵泡发育及植入前胚胎发育中的作用机制,具有源头创新性,为减少早期胚胎发育阻滞、提高囊胚形成率提供新的思路及理论依据; 3. 采用序贯培养法开展大规模的囊胚培养,从而获得了质量较好的囊胚进行移植,显著提高了临床妊娠率和种植率,得到了国内外同行的认可; 4. 首次在国内外将囊胚培养和玻璃化冷冻技术相结合,探讨利用Cryotop载体玻璃化冷冻对人类胚胎的影响,研究其对妊娠、复苏的影响,并在临床应用中显著提高了冻融胚胎移植的妊娠率和种植率。 【社会效益】 本系列研究成果通过论文发表（SCI论文）、国际学术交流、继续教育学习班、患者宣传教育等手段已在国内外产生了一定影响。已向省内外多家医疗机构推广应用,研究成果已在国内外杂志发表论文19篇,其中SCI论文13篇;发表论文多次被国内外同行专家引用,并且得到了国际媒体路透社的关注和称赞。本研究获得多项国家自然科学基金项目的资助,开展了《囊胚培养与移植在人类辅助生育技术中的应用》、《人类卵子、卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻操作班》等省级继续教育培训班,取得了良好的效果,在国内外产生一定的影响。