[01220522]合成功能化磁性纳米材料快速筛选湘西药用植物中酶抑制剂

中草药（药用植物）有效成分研究是发现和创制新药的一条重要途径,一直令人关注。然而,由于中草药化学成分一般都十分复杂,传统的研究模式费时费力且生物指纹图谱及活性成分不明确。因此,必须借助现代高新技术手段,发展与建立微量水平上生物活性成分的快速识别分离方法,才能突破传统研究模式的制约,加大寻找与发现新型药物先导的可能性。本项目建立了基于磁性纳米材料的天然产物黑（灰）色体系中活性成分（群）快速靶向分离的技术平台。首次成功的合成了α-葡萄糖苷酶、PTP 1B、磷酸二酯酶、酪氨酸酶、环氧化酶-1、黄嘌呤氧化酶负载的新型功能化磁性纳米材料。优化反应条件,确定各合成路线的最佳合成条件,消除磁性粒子表面的非特异性吸附,增加靶标的负载量、稳定性以及特异性吸附性能。选择活性较强常见湘西药用植物：黄芪、红廖、夹竹桃、杜仲、玉竹、姜黄、葛花、甘草进行系统研究。 （1）通过靶向垂钓技术首次确定了黄芪原始提取物中13个与α-葡萄糖苷酶相互作用的活性成分,及黄芪肝微粒体代谢液中与1个与α-葡萄糖苷酶相互作用的活性成分。通过2D HPLC-DAD-MSn技术确定活性成分特别是含量较低的活性成分的结构。同时对活性化合物进行系统分离,筛选其对α-葡萄糖苷酶抑制活性,得到各活性化合物的IC50值。 （2） 靶向筛选首次确定红廖中存在7个与α-葡萄糖苷酶相互作用的活性成分,针对红廖中化合物的极性及化合物结构特点,构思和设计了新型二维HSCCC分离纯化目标组分,并进行结构鉴定和活性研究。 （3） 通过靶向筛选首次确定了玉竹中9个与α-葡萄糖苷酶相互作用的活性成分,并通过梯度HSCCC结合Sephadex LH-20柱色谱进行靶向分离制备活性成分,鉴定结构,并系统研究了个活性成分对α-葡萄糖苷酶抑制活性。其中2个化合物2为首次从黄精属分离得到,1个化合物为首次从百合科分离得到。 （4） 通过PTP1B酶负载的磁性纳米材料快速靶向筛选出夹竹桃中2个与PTP1B酶有相互作用的活性成分,通过MSn裂解途径的详细分析,确定活性成分为绿原酸和异绿原酸。 （5） 首次通过磷酸二酯酶负载的磁性纳米材料快速筛选出杜仲中与磷酸二酯酶有相互作用的6个木脂素类活性成分,并使用制备液相色谱（PHPLC）和HSCCC技术导向分离制备目标活性化合物,系统研究化合物的磷酸二酯酶抑制活性,其中1个化合物为首次从杜仲中分离得到。 （6） 甘草具有明显的体外抑制络氨酸酶和黄嘌呤氧化酶的活性,通过建立的快速靶向筛选技术,确定甘草中含11个与络氨酸酶相互作用的活性物质及6个与黄嘌呤氧化酶相互作用的活性物质。通过仔细分析化合物的MSn图谱,确定了化合物的结构,并通过酶结合率的差异确定活性成分的相对活性。 （7） 通过环氧化酶-1负载的磁性纳米材料对姜黄提取物进行筛选,通过比对提取物反应前后的MS谱图,确定其中含3个主要成分与环氧化酶-1具有一定的相互作用。 （8）通过靶向垂钓技术明确了葛花提取物中对黄嘌呤氧化酶具抑制活性的主要成分,并通过分析化合物的MSn图谱,确定了6个主要活性化合物的结构。项目的成功实施将降低创新药物的研究成本、提供天然产物资源开发利用的捷径、加快发现新药和植物资源开发的速度,为疾病的诊断和防治奠定基础。因此课题的完成既具有重要的学术理论价值又有广阔的应用前景。