[01241727]抗人舌癌/抗VEGF双特异性抗体制备及应用研究

口腔鳞癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病机制目前还不十分清楚，而且也缺乏有效的治疗手段。

近年来研究表明，血管内皮生长因子（VEGF）是一种重要促血管形成因子，具有促血管形成和增加血管通透性的双重功能，且在肿瘤的发展和转移、创伤愈合和胚胎期血管形成等方面均起到重要作用。

应用VEGF抗体拮抗VEGF的生物学作用，可有效的抑制新生血管的形成。所以，如果抑制和破坏肿瘤区新生血管内皮细胞，阻断血供，从而导致肿瘤细胞坏死和阻断转移途径是治疗实体瘤的一种新策略。

双特异性抗体（bispecific antibody，BsAb）又称双功能抗体，是近年来肿瘤基因治疗的又一个热点。它有两个抗原结合部位，可分别结合两种不同的抗原表位，其中一个臂可与靶细胞表面抗原结合，另一个臂则可与效应物（如药物、效应细胞等）结合，从而将效应物直接导向靶组织细胞。

我们研制的抗人舌癌/抗VEGF双功能抗体，既能与人舌癌细胞结合，使癌细胞失去分泌VEGF的能力，又能同时与血管内皮细胞结合，使VEGF失去生物活性的双重作用，故能有效的抑制舌癌组织中的血管生长，由此遏制舌癌的发展，由于肿瘤的生长和转移与肿瘤区血管有着密切关系。

肿瘤血管为肿瘤细胞的生长输送营养物质，并排泄代谢废物，而肿瘤转移灶的形成和发展也依赖于肿瘤血管的形成。因此，切断肿瘤血供可达到抑制肿瘤生长和转移的效果。

所以我们研制抗人舌癌/抗VEGF双功能抗体可具有：

1.抑制肿瘤细胞释放促血管形成因子；

2.通过抗体介导阻断血管生长因子的产生；

3.抑制微血管内皮细胞的分裂和迁移；

4.干扰内皮细胞分化成为完整的毛细血管。

本项研究中细胞融合，二次杂交瘤制备是关键。

课题涉及的主要技术、经济考核指标有：

1.采用二次杂交瘤技术制备抗人舌癌/抗VEGF双特异性单克隆抗体。

2.制备的抗人舌癌/抗VEGF双特异性抗体特异性检测。免疫组织化学染色法，取人舌癌组织超薄切片，梯度酒精脱水，加双功能抗体及酶标抗体进行免疫酶染色，观察该双功能抗体与人舌癌的结合力和阳性率（检测50例）。

3.双功能抗体杂交瘤细胞染色体检测。秋水仙素分裂，低渗氯化钾暴露法。

4.双功能抗体效价测定。ELISA法和琼脂糖双向扩散法。

5.检测治疗前后人舌癌组织中的微血管密度及单位体积内的血管密度。

6.抗血管生成酶活性检测。纤维蛋白原和第Ⅷ因子检测，免疫组化法。

该课题研制成功将为口腔鳞癌抗血管治疗开辟一条新的治疗手段。

这种双特异性抗体可直接局部用药，避免全身给药的毒副作用，提高治愈率，减轻病人的经济负担，提高临床治愈率。

抗体制备试剂盒投放市场，可获得较大的经济效益和社会效益。