[01271676]珊瑚鱼中雪卡毒素快速检测技术和产品的研发

藻毒素是有海洋微藻产生的，可通过食物链富集，并对高等动物及人类产生危害的生物活性物质。

目前国际上尚无实时快速检测的技术和产品，常用的检测方法存在技术难度大、设备要求高、等待时间长等缺陷。

本研究优化了藻毒素-蛋白质载体抗原偶联条件，成功制备了藻毒素单克隆抗体，建立一种间接竞争ELISA检测方法，对毒素标准品及污染水产品检测稳定性良较好，为藻毒素检测试剂盒的开发与应用，可为建立一套完整的赤潮毒素监督体系提供基础。

本项目运用活泼酯法将藻毒素与载体蛋白KLH和BSA偶联，得到免疫抗原DA-KLH。通过紫外吸收光谱及吸收峰的差异鉴定完全抗原偶联成功。

设计合理的免疫程序，用DA-KLH免疫小鼠通过细胞融合技术将免疫脾脏和骨髓瘤细胞融合，经过阳性杂交瘤细胞的筛选、克隆化、细胞扩大培养和腹水收集，得到可稳定分泌抗藻毒素抗体的细胞株3E2C12E5。

高亲和力抗体经纯化后用于后续的检测实验，对各免疫反应条件进行了优化，建立了藻毒素间接竞争ELISA检测方法，绘制标准曲线，在对DA标准品和DA污染水产品的检测中验证该方法在2 ng/mL-10 μg/mL DA浓度范围有良好的线性关系。

本项目拟结合单克隆抗体技术和胶体金免疫层析技术，在制备藻毒素单克隆抗体的基础上，研制出藻毒素免疫胶体金快速检测试纸条，来实现水产品中藻毒素的实时、准确检测。

可满足监管部门对水产品快速检测的需要，也可为社会、公众共同关心的食品安全提供实时的信息指导。