[00128811]一种寡核苷酸介导的大肠杆菌基因敲除或点突变的方法
交易价格：
面议
所属行业：
生物医药
类型：
发明专利
技术成熟度：
正在研发
专利所属地：中国
专利号：201010103818.8
交易方式：
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联系人：
南京师范大学
进入空间
所在地：江苏南京市
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- 产权明晰
-
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
- 如实描述
技术详细介绍
本发明涉及一种通过寡核苷酸介导的重组工程手段对大肠杆菌基因组进行基因敲除或点突变的方法。首先通过重组工程将含有同源臂的蔗糖6-果糖转移酶基因与卡那霉素抗性基因的基因盒整合至靶基因，再将含同源臂的寡核苷酸通过重组工程与基因组上的同源序列进行同源重组而将蔗糖6-果糖转移酶基因和卡那霉素抗性基因去除，从而实现无任何碱基冗余的基因敲除和点突变。基因敲除的寡核苷酸设计和靶基因两侧的碱基序列一致，点突变的寡核苷酸则在寡核苷酸中引入需要突变的碱基。本发明不需要在体外克隆及预先在体外实现某个碱基位点突变或将突变基因转到细菌体内。本发明所述方法能够为遗传学、分子生物学、生物化学等研究及工业化生产提供一个有效的前期操作平台。
本发明涉及一种通过寡核苷酸介导的重组工程手段对大肠杆菌基因组进行基因敲除或点突变的方法。首先通过重组工程将含有同源臂的蔗糖6-果糖转移酶基因与卡那霉素抗性基因的基因盒整合至靶基因，再将含同源臂的寡核苷酸通过重组工程与基因组上的同源序列进行同源重组而将蔗糖6-果糖转移酶基因和卡那霉素抗性基因去除，从而实现无任何碱基冗余的基因敲除和点突变。基因敲除的寡核苷酸设计和靶基因两侧的碱基序列一致，点突变的寡核苷酸则在寡核苷酸中引入需要突变的碱基。本发明不需要在体外克隆及预先在体外实现某个碱基位点突变或将突变基因转到细菌体内。本发明所述方法能够为遗传学、分子生物学、生物化学等研究及工业化生产提供一个有效的前期操作平台。
