[01303697]夹脊电针对横断脊髓损伤大鼠抑制因子信号通路调控作用的实验研究

课题名称：夹脊电针对横断脊髓损伤大鼠抑制因子信号通路调控作用的实验研究

批准号：H2015030

课题来源：省自然科学基金（面上项目）

项目负责人：滕秀英

脊髓损伤（Spinal cord injury，SCI）是一种临床常见的中枢神经系统损伤，常导致患者严重伤残，并可引起各种并发症。据美国国家脊髓损伤统计中心报道，美国脊髓损伤的年发病率大约是40/100万，每年新增的脊髓损伤患者大约有12000人。据我国国家生产安全委员会的初步统计，我国每年因生产事故所造成的脊髓损伤患者就达5～6万人，因交通事故造成的脊髓损伤患者多达7～8万人。据估计，目前我国脊髓损伤患者已达数百万人。脊髓损伤患者虽然大多有接近正常的寿命，但往往留有严重残疾，极大地降低了他们的生活质量。研究显示外伤性脊髓损伤患者出院后1年，尽管功能有所改善，但很少有人能从事生产生活，脊髓损伤给个人、社会带来了沉重的负担。

由于脊髓损伤病理变化的某些机制还不十分明确，及其病理变化的迅速性、进行性和不可逆性，历来是医学界的难题，因此，研究治疗脊髓损伤的机制探寻安全有效的治疗方法具有非常重要的医学意义、经济意义和社会意义。

因此，针对脊髓损伤某些病理变化机制不明确及其病理变化迅速性、进行性和不可逆性等问题进行研究，探寻夹脊电针对横断脊髓损伤大鼠抑制因子信号通路的调控作用。

1、证实夹脊电针能刺激脊髓损伤区巨噬细胞表达NgR

脊髓损伤区浸润的巨噬细胞上NgR的表达一方面促进了巨噬细胞吞噬髓鞘碎片，清除坏死组织残片的作用，另一方面促进巨噬细胞与抑制因子结合，从而清除这些髓鞘抑制物，促进神经再生。

本课题以浸润的巨噬细胞中的NgR表达为实验观察指标，建立脊髓横断大鼠模型，分为2Hz电针组，50Hz电针组，100Hz电针组，模型组，假手术组（空白对照）。

应用夹脊电针治疗，第3天、第7天和第14天取材并分离巨噬细胞，使用HE染色法、SABC免疫组化染色法、双标免疫荧光化学染色法等方法观察巨噬细胞表达NgR的情况。

从细胞水平研究夹脊电针治疗对脊髓损伤区巨噬细胞表达NgR的影响。

HE染色法、SABC免疫组化染色法、双标免疫荧光化学染色法均显示，在假手术组的脊髓组织中没有出现浸润的巨噬细胞;其他各实验组脊髓组织中均发现有表达NgR的巨噬细胞。

各组大鼠脊髓组织表达 NgR 的巨噬细胞的数目具有差异性并且随时间变化差异性显著增大：与假手术组比较， 模型组中表达 NgR 的巨噬细胞数量明显增加，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）;与模型组比较，2Hz夹脊电针组中表达NgR的巨噬细胞数量明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）;与2Hz夹脊电针组比较，50Hz夹脊电针组中表达NgR的巨噬细胞数量明显增加，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）;与50Hz夹脊电针组比较，100Hz夹脊电针组中表达 NgR 的巨噬细胞数量明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2、证实了夹脊电针能够对大鼠脊髓横断损伤局部RhoA/Rock信号通路中Cdc42、Rac1和RhoA基因及蛋白的表达起到调控作用，揭示了夹脊电针能通过抑制RhoA/Rock信号通路，调控脊髓损伤的微环境，促进轴突再生的作用机理。

以神经生长抑制信号通路中Cdc42、Rac1和RhoA基因及蛋白的表达为检测指标，建立脊髓横断大鼠模型，分组、处置及取材同上，采用实时荧光定量 PCR 法及Western Blot 法，检测 Cdc42、Rac1 和 RhoA 基因及蛋白的表达研究夹脊电针对脊髓损伤大鼠神经生长抑制信号通路的影响，阐述夹脊电针治疗脊髓损伤的分子信号作用机制。

实时荧光定量PCR法及Western Blot 法均显示，与假手术组比较，模型组中Cdc42和Rac1基因表达降低，RhoA基因表达升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比，夹脊电针组中Cdc42和Rac1基因表达升高，RhoA 基因表达降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）;与2Hz夹脊电针组相比，50Hz夹脊电针组中Cdc42和Rac1 基因表达升高，RhoA基因表达降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）：与50Hz夹脊电针组相比，100Hz 夹脊电针组中Cdc42和Rac1基因表达升高，RhoA 基因表达降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

夹脊电针能够对大鼠脊髓全横断损伤区RhoA/Rock信号通路中 Cdc42、Rac1和RhoA基因及蛋白的表达起到调控作用，通过调控脊髓损伤区的微环境，促进轴突再生及神经生长。

证明夹脊电针能够阻断 Nogo/NgR-RhoA/Rock 信号通路，为脊髓损伤的临床治疗奠定实验基础。为临床治疗脊髓损伤开辟新途径和新思路。

证实夹脊电针能刺激脊髓损伤区巨噬细胞表达NgR。

证实夹脊电针能够对大鼠脊髓横断损伤局部RhoA/Rock信号通路中Cdc42、Rac1和RhoA基因及蛋白的表达起到调控作用，揭示夹脊电针能通过抑制RhoA/Rock信号通路，调控脊髓损伤区的微环境，促进轴突再生神经生长的作用机理。

得出夹脊电针能够阻断 Nogo/NgR-RhoA/Rock 信号通路。

发表论文多篇，其中几篇未标注省自然课题项目，其中2篇已录用，已见刊。

培养硕士研究生2名。