[00131994]全新DNA分子量标准(DNA marker)制备模

项目简介 DNA分子量标准(DNA molecular weight standards, DNA marker)是目前分子生物学和基因工程研究中广泛应用的电泳“耗材”。其应用具有着广阔的生物技术、医药、农业等相关科研领域，市场需求很大。几年前国内科研人员使用的都是国外公司生产的DNA分子量标准；近5年来，各种常用的DNA分子量标准已经完全国产化，国内北京的天根生化(已被QiaGen收购)和广州的东盛生物就是以生产DNA分子量标准而起家的两家生物公司。而且由于国内廉价的劳动力，国外生物试剂公司多在国内找代工为之生产。DNA分子量标准的制备目前主要以载体酶切和PCR扩增两种方式进行；由于PCR扩增的方式灵活，同时制备的DNA分子量标准条带均一，所以是目前国内DNA分子量标准制备业的主要生产方式。但是PCR扩增设备投入高、产能低、成本高，是一种劳动密集型的生产活动，其现状亟待改观。 技术特点 本成果建立了一种全新DNA分子量标准制备（生产）模式。本模式由如下两个互补的体系构成： （1）超级载体的构建 利用全新基因工程原理构建了一系列DNA分子量标准制备用的载体（pVEC100\pUJN-1\pYe200等），经文献和专利搜索，目前世界范围内尚没有第二方（生物技术公司、实验室等）能够构建同种水平的“超级”载体，仅以单酶切就可以产生所需要的DNA片段组合。 （2）PCR扩增新模式 PCR技术生产DNA marker技术的新突破，成本只有现有技术（或者说PCR生产模式）的五分之一(同等产量，DNA聚合酶、dNTPs、primers等原料的用量只有普通PCR的1/3-1/10)，同时工作效率提高10倍以上，从而大大降低对设备、耗材(PCR仪，一台PCR仪可以匹敌10台以上的机器)和人力的要求。本项目技术突破（或者说模式）为原始创新，策略和工艺水平独一无二，同时比现有模式更简单、更高效、成本更低。 主要技术指标：利用本成果之超级载体结合PCR扩增新模式可以生产目前市场上流行的100bp ladder、200bp ladder、DL2000、DL3000、1kb ladder等各种DNA分子量标准(DNA marker)。利用大肠杆菌发酵培养可以将生产规模放大到工业级生产，经过实验室水平的小试，每升LB发酵液（菌体）可以制备500支DL2000或DL3000，市场价值3万元左右。