[01333257]抗肿瘤新药树舌多糖注射液的研究

恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的一种主要疾病,其发病率逐年上升,而目前临床上常用的抗肿瘤药物多具有较大的毒性。故寻找高效低毒的抗肿瘤药物和抗肿瘤辅助药物具有重要的意义。近年来中药多糖作为抗癌药物,越来越受到人们的重视。 树舌,是一种大型担子菌,中国大部分省区均有分布,生于阔叶树的树干和树干的基部。其性平、味微苦,具有清热、消积、化痰、止痛、抗癌等功效。临床有用于治疗乙型肝炎、食道癌、神经衰弱和肺结核等病证。树舌多糖GF就是从中药树舌中提取的一个多糖组分。经多次实验证明：它对小鼠HepA瘤、S180和L7811白血病等肿瘤有显著性的抑制作用。本研究是基于前期研究成果,从分子水平研究树舌多糖GF对癌基因与抑癌基因表达影响的抗瘤作用机制,同时研究树舌多糖GF对环磷酰胺增效减毒作用及其免疫学机制,旨在开发一种新型有效的、低毒（或无毒）的抗肿瘤药物及抗瘤辅助药物,完善了树舌多糖GF抗肿瘤作用的分子机理,为其早日进入临床,减轻肿瘤病人痛苦奠定了坚实的理论基础。 本课题组进行了树舌与树舌多糖GF药学研究：完成了树舌生药鉴定、树舌多糖GF的粉针剂与安全性试验、急性毒性实验。进一步对树舌多糖GF免疫调节作用和其抗肿瘤作用进行了较为系统的研究。在此基础之上,在本课题的研究中,主要从分子水平研究树舌多糖GF组分对癌基因和抑癌基因表达的影响,同时研究树舌多糖GF对化疗药物的增效减毒作用,结果发现树舌多糖GF可以下调癌基因表达及上调抑癌基因的表达,并对化疗药物环磷酰胺有显著性增效和减毒作用及其免疫学机制。 一、树舌多糖GF的抑瘤活性研究 通过SDS-PAGE,观察树舌多糖GF对HepA瘤血清蛋白组分的影响,在Mr115kd处,较正常对照组,阴性对照组浅染,树舌多糖组和阳性对照组均能使该带恢复正常。树舌多糖GF可使HepA瘤血清异常蛋白组分恢复正常。通过SDS-PAGE,观察树舌多糖GF对HepA瘤组织蛋白组分的影响,a：在Mr65kd处,比较正常对照组,阴性对照组深染明显;树舌多糖组能使之变浅;阳性对照组对此无明显改变。b:在Mr53.7kd处,正常对照组呈浅染的条带,而阴性对照组呈深染的区带,树舌多糖GF呈浅染带,接近于正常对照组,阳性对照组也呈浅染带,但不能使之恢复正常;c:在Mr12.6kd处,正常对照组、阴性对照组、阳性对照组均无显著差异,但树舌多糖组在该处呈现深染区带。结果表明树舌多糖GF可使HepA瘤某些异常蛋白组分恢复正常。 二、树舌多糖GF组分对癌基因与抑癌基因表达的影响 通过分子杂交与免疫组化等技术研究发现树舌多糖GF可显著降低N-ras和C-myc基因mRNA 与蛋白表达量。应用ELISA法,观察树舌多糖GF对抑癌基因p53基因表达的影响,树舌多糖GF能明显减弱肿瘤组织中突变型p53基因的表达,且使P53含量接近于正常对照组。应用免疫组化技术,经多媒体彩色并力图文分析系统分析表明,树舌多糖GF可使p16基因和Rb基因编码蛋白质表达量显著增加。 三、树舌多糖GF对化疗药物CTX的减毒增效作用 设置不同剂量树舌多糖GF与不同浓度CTX荷瘤小鼠给药,观察抑瘤率,筛选出两药的最佳剂量和最低有效剂量。常规细胞计数法测定外周血WBC数;手术摘取胸腺、脾脏并称重计算脏器指数,观察树舌多糖GF对化疗药物所致外周血WBC数降低及脏器指数与体重下降有恢复作用。测定抑瘤率,计算q值来判断树舌多糖GF对CTX的增效作用;取瘤组织,甲醛固定,常规方法制片光镜观察瘤组织形态改变。结果表明树舌多糖GF对化疗药物CTX有明显增效作用。 四、树舌多糖GF减毒增效的免疫学机制 应用ELISA法、小鼠碳粒廓清法及腹腔巨噬细胞功能测定法、间接免疫荧光单克隆抗体法、体外培养法研究发现,树舌多糖GF对IL-2、单核吞噬细胞功能、T细胞亚群及脾细胞增殖作用有明显提高作用。 目前已有少数几种多糖类制品进入常规药品之列,如香菇多糖、褶裂菌多糖、云芝多糖等,但大部分尚处于试验阶段或临床阶段,有关树舌多糖GF抗肿瘤活性研究与分子生物学作用机制以及对化疗药物的增效减毒作用的研究在国内尚属空白。本实验在前期工作基础上通过观察树舌多糖GF对癌基因与抑癌基因的表达作用及对化疗药物的增效减毒作用与其作用机制,扩大了该药的作用范围,为其早日作为一种新型抗癌药及抗癌辅助药物进入临床应用阶段打下了坚实的基础。