[01349851]青海地区布氏杆菌基因型分析及其外膜蛋白抗原性研究研究

采用MLVA-16分型法表明我省布鲁菌菌可被分为7大基因群（A～G群）24个基因型,认为我省目前流行的布鲁菌存在丰富的基因多态性。通过原核表达,布鲁氏菌的外膜蛋白Omp10,Omp15,Omp19,Omp22,Omp25,Omp31在DE3表达菌的包涵体中表达,这样导致蛋白失去原有的活性,这可能与布鲁菌本身表达的外膜蛋白之间存在一定的差异,经过复性,虽然在活性上恢复了原本的生物学功能,但是其原本的结构发生了部分变化。纯化蛋白后,Omp25表达量最高,达1.71mg/mL。表达量高可能与羊种布鲁菌的毒力比较强有一定关系。转染293T细胞,上述Omps蛋白在真核细胞的细胞浆内和细胞膜上都发现了明显的荧光信号,为体内免疫试验奠定了理论基础。CCK8试验表示布鲁菌不同外膜蛋白作用于免疫应答中的关键部分小鼠脾淋巴细胞后,细胞增殖能力显著增强,具有增强细胞免疫功能的作用。MTS试验发现Omp10、Omp22、Omp25、Omp31对淋巴细胞活力的影响更明显,可很好刺激淋巴细胞增殖,刺激小鼠产生细胞免疫应答。流式细胞仪进行检测,在小鼠脾脏中CD3+、CD4+和CD8+都有一定的比例产生,而且实验组CD4+/CD8+比值要小于PBS组,认为CD8+介导的免疫占据了主要作用,促进CD8+T淋巴细胞的增殖分化,表明激发了显著的CTL效应。本实验将布鲁菌的Omp10、Omp15、Omp19、Omp22、Omp25、Omp31真核表达后免疫小鼠,检测了免疫后小鼠血清中抗体水平,各外膜蛋白刺激小鼠血清中的抗体呈现出上升的趋势,说明布鲁氏菌核酸疫苗诱导小鼠产生了体液免疫效果。在免疫第49d时,Omp31组达到免疫期最高水平。在免疫第56d时,Omp31组小鼠血清抗体水平呈现下降趋势。在整个免疫期中Omp31组小鼠血清抗体水平持续升高。从免疫过程中可以看出Omp31组的小鼠血清抗体效价最高。