[00136228]beta-防御素-2的基因工程菌培养生产及在全身性

项目简介： 全身性感染（sepsis, 又称脓毒症）及其后续症（严重全身性感染、感染性休克、多器官功能障碍综合症）系外科大手术、创（烧）伤、感染后所致的全身炎症反应综合症，严重全身性感染是ICU的主要并发症和首要死亡原因，其死亡率高达30%-50%。防御素是新近发现的内源性的小分子阳离子抗菌肽，体外研究已表明beta-防御素-2具有多种生物学活性，提示beta-防御素-2可能在全身性感染的发生发展中具有重要的作用。 在浙江省科技厅重点科研项目和国家自然科学基金的资助下，本项目组开展了"beta-防御素-2的基因工程菌培养生产及在全身性感染中的作用"的研究，旨在开创生产具有生物活性的防御素的技术路线，并探讨防御素在全身性感染发生发展中的作用。 研究发现：①优化beta-防御素-2基因的密码子，比较其在大肠杆菌、枯草杆菌和毕赤氏酵母菌中的表达，通过多个表达系统改造、重复基因构建和培养条件优化等多种新策略，将beta-防御素-2表达水平从10mg/l提高到100mg/l，最终表达水平高达750 mg/l以上. 随后开发了一条简单高效的分离工艺，纯度高达99%, 总收率达到25%。②在体研究表明，重组beta-防御素2明显减少大鼠呼吸道感染的绿脓杆菌的数量、调控炎症反应、减轻肺损伤程度、提高全身性感染大鼠的7天生存率。③进一步的分子遗传学研究表明beta-防御素基因的遗传变异与全身性感染发生发展密切相关。④此外，本项目发现beta-防御素基因在外周血的可诱导性表达存在个体差异，且beta-防御素2基因的差异表达与其启动子内的单核苷酸多态性不相关。研究成果不仅开创了一条高水平生产具有生物活性的防御素的技术路线，而且探讨了beta-防御素2在全身性感染发生发展中的作用，并为全身性感染的防治提供了新的靶向。 至2006年4月底，本项目共发表论文25篇，其中SCI收录论著16篇；论文被引用次数为68次，其中单篇论文他引次数最高为17次。经浙江省科技信息研究院科技查新证实：除项目组成员发表的文献外，上述研究成果①-④在国内外所检文献范围内未见报道，研究成果处于国际先进水平。