[01407760]一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂及其制备方法与应用

酒精性肝病(Alcohol-induced liver disease，ALD)是由于长期大量饮酒所导致的肝脏疾病，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化等。酒精中毒是仅次于肝炎病毒导致肝损害的第二大病因。近年来ALD在中国的发病率呈上升趋势，已成为严重威胁人类健康的多发病和常见病。乙醇80％～90％在肝脏代谢，经过乙醇脱氢酶的催化，氧化为乙醛，再经乙醛脱氢酶催化转成乙酸，最终形成二氧化碳。在乙醇氧化过程中脱下大量的氢离子与辅酶Ⅰ(Nicotinamide Adenine Dinucleotide，NAD)结合，NAD被还原成为还原型辅酶Ⅰ(NADH)，即NAD++H++2e-=NADH，使NADH/NAD上升，从而使细胞的氧化、还原反应发生变化，造成依赖于NADH/NAD的物质代谢发生障碍，而成为代谢紊乱和致病的基础。一方面乙醇促进体内活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)与活性氮自由基(reactive nitrogen species，RNS)产生过多，超出机体抗氧化物的清除能力，另一方面受多因素影响体内还原型谷胱甘肽(glutathione，gSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)等抗氧化成分减少，最终导致氧化与抗氧化系统的动态平衡失衡，从而促发氧化应激。该过程生成的自由基可引起生物膜脂质过氧化、细胞内蛋白酶变性、DNA氧化修饰等一系列毒性作用，最终导致肝细胞坏死或凋亡。氧化应激产生的自由基可使线粒体膜通透性增加，使线粒体DNA、gSH、氧化磷酸化蛋白及脂质等成分改变，最终引起细胞能量代谢障碍，导致细胞死亡。此外，乙醛在生理状态下能与多种蛋白发生共价结合，并主要在中央静脉周围的肝细胞中形成稳定的和不稳定的乙醛蛋白加合物(acetaldehyde protein adducts，APA)，造成损伤性效应：①APA形成导致蛋白质结构改变和功能异常，如蛋白酶失活、DNA修复蛋白功能障碍、gSH耗竭、线粒体损伤、氧利用障碍等，从而导致肝细胞脂肪变、肝脏纤维化等病理变化。②APA可作为抗原诱导免疫反应，产生相应抗体，引起肝细胞炎症、坏死及纤维组织增生等病理变化。对酒精性肝病的治疗尚无特效药，维生素，还原型的谷胱甘肽等药物对于预防酒精性肝病及延缓病程有一定作用。 近年来证明有免疫炎症因素参与ALD的发病机制且越来越受到重视，其中补体成分发挥重要作用。补体是存在于人和脊椎动物血清及组织液中的一组30多种具有酶样活性的球蛋白，补体固有成分加上其相关受体和调节因子共同组成补体系统，参与炎症及免疫调节等效应，具有重要的病理生理功能。补体系统的激活与调控是一个复杂的过程。其中C5b与补体途径终末部分(C6、C7、C8和C9)结合，形成膜攻击复合物(membrane attack complex，MAC)。MAC既能直接导致细胞溶解，又能刺激细胞释放炎性细胞因子。肝脏是80-90％血浆补体成分的生物合成站点，并表达了多种补体受体。研究表明：补体系统的激活参与ALD进程中的损伤与修复机制，但通过补体调控减轻酒精性肝损伤的研究未见报道。体内补体调控系统包括液相调节因子和膜结合性调节因子。液相调节因子为多种液相血清蛋白，不能定位于局部，其调控会不可避免的同时影响了对机体有利的调理、炎症和杀菌等作用，容易导致免疫调节失衡，且存在生物活性低等局限性，从而极大程度上限制了其实际临床应用价值。膜结合性调节因子锚定于特定细胞的膜表面，使自身细胞免受补体攻击损伤，分为两类：一类抑制C3转化酶活性，包括补体受体1(Complement receptor1，CR1)、衰变加速因子(decay-acceleratingfactor，DAF)和膜辅蛋白(membrane cofactor protein，MCP)，表达于啮齿类动物的Crry在结构和功能与人类的CR1类似；另一类抑制终末补体途径MAC形成，主要通过CD59的活性来实现。CD59能与C8和C9结合，从而抑制MAC的形成。利用补体受体2(Complement receptor2，CR2)连接膜结合性调节因子(fH，Crry或CD59)，通过CR2靶向性结合到补体活化和损伤局部，利用膜结合性调节因子特异性调节补体级联反应的不同阶段，具有靶向性强、高效、安全、不影响宿主全身免疫功能等优点。CR2的配体是C3裂解后产生的iC3b，C3dg和C3d等镶嵌于细胞表面的碎片。而C3裂解→C3b沉积在活化细胞表面→非活性的iC3b→C3dg这一过程相对缓慢，因而提供了相对长的作用时间。 该专利旨在将前期研究的成果“双靶性补体抑制剂”转化应用于临床酒精性肝病的治疗。CR2与CR2配体(C3裂解产物iC3b、C3dg和C3d等)连接，引导至补体活化局部(病灶部位靶向)；fH、Crry、CD59分别调节补体通路不同位点，发挥相应效应(靶向效应)，达到治疗酒精性肝病的目的。 根据前期研究基础，该项目已获国家知识产权局授权发明专利，因此技术仅处于动物模型研究还未进行技术转化应用。