[01423014]草鱼出血病核酸疫苗的研制

草鱼是主要淡水大宗鱼类养殖品种之一，因其肉味鲜美，养殖成本低，经济效益高，深受广大养殖户的喜爱和消费者的青睐，具有广阔的市场情景。但近年来，随着养殖规模的逐步扩大和集约化程度的提高，养殖环境逐渐恶化，加上缺乏有效的防疫和检疫技术措施，致使草鱼养殖病害不断发生和流行。根据水产养殖病害测报分析，草鱼养殖的主要病害有草鱼病毒性出血病、肠炎病、烂鳃病、赤皮病和“肝胆综合症”，其中以草鱼病毒性出血病危害最为严重，常引起鱼种及成鱼的大批死亡。草鱼出血病发病死亡率高达80%以上且目前没有有效的治疗药物，发病造成的经济损失十分严重，因此，控制和预防草鱼病毒性出血病的发生对养殖生产工作十分重要。本项目采用现代分子生物学和基因工程技术，进行草鱼出血病核酸疫苗的研究与应用。核酸疫苗，也称基因疫苗（genetic vaccine）或DNA疫苗(DNA vaccine)，是指将含有编码某种抗原蛋白的外源基因克隆到真核表达质粒载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的，该疫苗具有安全、价廉、易于制备、改造等优点。通过项目实施，成功的建立了草鱼出血病RT-PCR诊断技术，制定了江苏省地方标准《草鱼出血病病毒（GCHV）逆转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法》（DB32/T1738—2011）；选用较强启动转录活性的β-肌动蛋白启动子改造pFast Bac TMDual基因转移载体，将草鱼呼肠孤病毒基因VP6和VP7克隆至载体上，制备了草鱼出血病核酸疫苗，初步实验结果表明免疫保护率达95%以上；构建了VP6和VP7原核表达载体，制备了亚单位疫苗，实验室免疫保护率分别达到100%和85%；利用家蚕杆状病毒BmNPV-II表达系统制备了VP6草鱼出血病口服疫苗；建立了草鱼出血病核酸疫苗和重组疫苗免疫方法及免疫效果评价技术。该项目建立了草鱼出血病RT-PCR诊断技术，制定了江苏省地方标准，研制了草鱼出血病核酸疫苗与基因重组疫苗，在草鱼出血病诊断技术与鱼类核酸疫苗研制领域达到国内领先水平。该项目成果于2010-2012年在徐州市铜山区、常州市武进区、淮安市楚州区（现淮安区）、大丰市、射阳县、句容市等草鱼主要养殖地区推广应用，总计推广应用面积17850亩，节支总额239.19万元，新增效益298.10万元，共新增利润537.29万元，新增利税26.86万元。