[01433605]咳特灵制剂的质量控制与优化

1.任务来源 任务来源于桂林市科学研究与技术开发计划项目,项目名称为：咳特灵制剂的质量控制与优化,合同编号：20130103-10,对咳特灵制剂的质量标准进行研究。 2、应用领域、技术原理及性能指标 2.1 本项目旨在研究咳特灵制剂的的质量标准,建立基于小叶榕有效成分为指标的含量测定方法,运用建立多指标活性成分分析和整体性指纹图谱分析相结合的质量控制方法,建立合理、实用和有效的质量评价技术指标体系,为制定和修订国家咳特灵制剂的质量标准提供科学依据。并对小叶榕中的指标成分牡荆素对人肝癌SMMC-7721细胞的影响及其可能的作用机制进行初步探讨,为牡荆素抗肿瘤新药的开发提供科研基础。 2.2 完成的性能指标 1)本项目建立了小叶榕干浸膏的LC-MS指纹图谱,确定了18个共有峰;图谱重复性,精密度良好,专属性强,为进一步研究和制订小叶榕叶及其提取物的质量控制提供科学依据;同时采用LC-MS法测定小叶榕干浸膏中的12种成分含量,为深入研究小叶榕的药效物质基础及其成分的药代动力学提供理论依据。研究成果申请专利1项。 2)本项目研究了小叶榕及咳特灵制剂的质量标准,为制定咳特灵制剂的国家标准提供科学依据。 3)本项目采用MTT法、流式细胞术等方法对小叶榕主要成分牡荆素的抗肝癌作用进行研究,观察人肝癌SMMC-7721细胞的增殖情况,以及Casepase-3、Bax、P53、PARP和Bcl-2等基因表达水平的变化,初步探讨牡荆素对人肝癌SMMC-7721细胞的影响及其可能的作用机制,为牡荆素抗肿瘤新药的进一步发展提供科研基础。 4)本项目在国家中文期刊上发表学术论文3篇,其中中文核心期刊2篇。 3、技术的创造性与先进性 3.1 本项目首次建立超高液相-质谱仪联用技术（ UPLC/MS） 分析小叶榕干浸膏中的主要成分,并进行鉴定和含量测定。鉴定出小叶榕干浸膏中的18个成分,并通过对照品确认;通过建立对照品标准曲线对小叶榕干浸膏中12个成分的含量进行测定,实验结果为今后修订咳特灵制剂的质量标准及这些成分的体内代谢等研究提供灵敏度高且特异性强的检测手段以及科学依据。 3.2 本项目首次发现牡荆素具有抑制SMMC-772细胞增殖以及诱导细胞凋亡的效应,并且存在时间-剂量依赖性,其作用机制可能是与促进P53及其下游靶基因Bax的表达,下调Bcl-2,降低Bcl-2/Bax比率,增加细胞线粒体膜通透性,降低线粒体膜电位（ΔΨm） ,上调及活化Caspase-3,降解PARP,从而使具有DNA修复功能的PARP失去修复DNA的功能诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。研究结果为开发牡荆素成为一种具有潜在性的新的抗肝癌药物提供科研基础。 4、技术的成熟程度、适用范围和安全性 （1）本项目建立了小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,为深入研究小叶榕干浸膏的药效物质基础及其作用机制提供了参考,对今后国家药典委员会修订小叶榕干浸膏及咳特灵制剂的质量标准提供科学依据。 （2）本项目建立了LC-MS的方法鉴别和定量测定了12种小叶榕干浸膏的成分。专属性强,灵敏度高,为深入研究小叶榕干浸膏的药效物质基础、有效成分的药代动力学奠定了良好的科研基础。在研究中发现小叶榕干浸膏中酚类成分含量很高,酚类化合物有抗菌抗病毒作用,亦有祛痰、平喘作用,很有可能亦是有效成分之一。今后进一步研究和阐明小叶榕干浸膏中的有效成分,提高小叶榕干浸膏的质量标准从而不断提高该产品的国际竞争力。 5. 应用情况及存在问题 小叶榕中黄酮类化合物牡荆素具有抑制人肝癌SMMC-772细胞增殖以及诱导细胞凋亡的效应,我们初步探讨其抗肝癌作用和作用机制。后续实验中我们将从RT-PCR、转染以及体内实验验证,其作用机制是否依赖p53的线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡？牡荆素有可能成为抗肝癌药开发的候选化合物。