[01439035]苦参碱干预金黄色葡萄球菌主要毒力因子诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡机制研究

通过本项目的实施,现已成功建立奶牛乳腺上皮细胞细胞株（BMECs）,并以此为模型,研究了不同生理因素和药物对金黄色葡萄球菌粘附BMECs的影响;检测了苦参碱等药物对BMECs增殖的影响,以及苦参碱等药物在体外对金黄色葡萄球菌分泌α-溶血素和PV-杀白细胞素的影响;获得了产α-溶血素金黄色葡萄球菌对BMECs的毒性作用和苦参碱干预后对细胞保护作用的数据;通过检测金黄色葡萄球菌感染BMECs和苦参碱干预后侵入细胞的金黄色葡萄球菌以及细胞炎症相关因子的表达,从而揭示苦参碱干预金黄色葡萄球菌侵入奶牛乳腺上皮细胞的可能机制;课题组通过和哈尔滨兽医研究所合作获得了pvl阳性金黄色葡萄球菌ATCC49775的同源pvl基因敲除株并检测了其对奶牛乳腺上皮细胞的毒性作用,从而解释了PV-杀白细胞素是金黄色葡萄球菌的主要毒力因子;通过原核表达纯化获得了金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素的LukS-PV和LukF-PV组分,并检测了重组PVL对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响,从而揭示重组PVL致奶牛乳腺上皮细胞凋亡的可能机制以及苦参碱等药物干预后对细胞的保护作用。通过项目实施,发表sci收录文章5篇,发表CSCD收录文章3篇。申报专利2项,1项获国家发明专利授权。培养了3名硕士研究生并以较好成绩毕业;培养了15名本科生完成了毕业论文。制备了2个乳房注入制剂,苦胆注射液和苦参碱注入剂。通过在区域试验,发现对奶牛细菌性乳房炎都有较好治疗效果。