技术详细介绍
成果研究领域/方向：
成果简介：单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）与志贺氏菌（Shigella ）是常见的食源性致病菌。本项目利用单核细胞增生李斯特氏菌和志贺氏菌的致病基因设计特异性引物及探针，分别建立了普通双重PCR及双重荧光定量PCR技术，并将此技术应用到了人工污染的脱脂灭菌乳的检测中。针对单增李斯特菌与志贺氏菌致病基因，利用TaqMan探针的荧光定量PCR技术，首次建立了一种对单增李斯特菌与志贺氏菌双菌同步、快速、定量的检测方法。该方法可在3-4小时间筛选出阳性结果；经过增菌培养，对等检样品可在第二个工作日可得到阳性、阴性、疑似结果的报告；制备获得了荧光定量PCR的标准品；检测限为100CFU/ml，相当于10CFU/PCR，远低于1000CFU致病菌量。本项目所建立的双重PCR与双重荧光定量PCR检测单增李斯特菌与志贺氏菌方法，已经用于检测中。先由协作单位河南省疾病预防控制中心进行试用，获得了理想的检测效果，PCR检测结果与国标法相一致，该技术相对于国标法通过培养基分离，纯化，然后动力学，血清型分析可有效减少检测时间5天。