[01593057]一种检测核酸序列变异的方法

基因变异检测在分子诊断中占有突出位置,如微生物耐药突变、先天性遗传病的人类胚细胞突变和肿瘤发生的体细胞突变等。基因变异种类多、位点多、分布广,这就使得检测位点有限的实时PCR分型模式难以发挥作用。厦门大学李庆阁课题组发明的“多色探针融解曲线分析”技术,在很大程度上解决了此问题,该技术利用探针与靶序列结合程度的差异--亦即熔点的差异--来区分突变型和野生型,通过多色探针的组合,实现多个突变的同时识别。该技术已于2009年申请国际发明专利,目前该专利已在美国、欧洲和中国授权（专利名称：一种检测核酸序列变异的方法,国际专利美国授权号：US 8,691,504 B2;国际专利中国授权号：ZL 2010 80023112.9;并已于2015年3月收到国际专利欧洲授权通知书）。 利用该技术,厦门大学李庆阁课题组前期已完成了5种结核病一线治疗药物和3种二线治疗药物合计50余种耐药突变的检测、4种乙肝病毒治疗药物合计20余种突变的联合检测、29种EGFR突变检测、7种KRAS突变检测、24种β-地中海贫血突变检测、3种非缺失型α-地中海贫血突变检测、16种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）突变检测、30种HPV分型等。其中的结核耐药突变检测试剂在“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项（2008ZX10003-004,耐药结核病及免疫学诊断技术和产品的研究）支持下,已经制成结核耐药突变检测试剂盒（配有熔解分析判读软件）,其中结核分枝杆菌利福平耐药突变检测试剂盒和结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒已于2013年1月获得由国家食品药品监督管理局颁发的医疗器械注册证书,这是目前国内外结核耐药突变检测试剂中覆盖突变位点数最多的试剂。β-地中海贫血突变检测试剂于2009年3月由南方医科大学牵头组织了6家单位进行了多中心验证,共计使用1022份临床标本进行双盲检测,结果所有标本都获得了与测序结果一致的结果。这是β-地中海贫血突变检试剂的首个多中心验证,该试剂也已于2013年9月获得由国家食品药品监督管理局颁发的医疗器械注册证书。该试剂盒也是迄今为止,在国内外同类试剂中检测β-地中海贫血突变数目最多、速度最快、准确度最高的试剂。 多色探针熔解曲线技术引起了多家国际知名企业的兴趣,美国诊断试剂前5名企业Gen-Probe公司董事长Henry L.Nordhoff博士、国际知名分子诊断企业德国Qiagen公司检测试剂部主管Dirk Loeffert博士等四人次、美国知名企业实时PCR专业厂家Idaho Technology研发副总裁Carl Wittwer博士等专程来访,表达合作意向。目前课题组已与国际知名企业Bio-Rad公司就诊断试剂开发达成合作意向。