[01595642]桂枝去桂加茯苓白术汤调控miR-21改善急性肾损伤

一、课题来源与背景：中国每年约有300万例AKI患者，约50％患者可进展为慢性肾脏病，但漏误诊率可高达78％。AKI的发病机制尚未完全清楚，普遍认为缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)、炎症反应、细胞凋亡等起重要作用。由于AKI发病的原因复杂，涉及的致病因素多，因此，探索多靶点药物防治AKI具有重要意义。生物体内一个miRNA能调控多个靶基因，包括转录因子、细胞因子、受体等，仅占人类基因1％的miRNA可能调控30％以上的基因表达。miR-21在AKI动物与人的肾组织、血液、尿液中均表达上调，通过多条信号通路调节细胞凋亡和组织炎症反应参与AKI病理生理过程。在前期工作中，创新性应用《伤寒论》经方“桂枝去桂加茯苓白术汤”治疗AKI患者取得了良好的临床疗效，BUN、Cr、NGAL和KIM-1明显降低，肾功能快速恢复。应用该方剂干预脓毒血症性AKI，可改善脓毒血症对肾组织的损伤，其机制与抑制NF-κB、TNF-α信号通路有关。根据前期工作和文献资料，提出推断：桂枝去桂加茯苓白术汤通过上调miR-21表达抑制肾组织炎症反应，抑制肾小管上皮细胞凋亡，诱导肾小管上皮细胞增殖，促进AKI患者肾功能恢复。 二、研究目的与意义：阐明桂枝去桂加茯苓白术汤抗急性肾损伤的生物学作用，探明miR-21在桂枝去桂加茯苓白术汤抗急性肾损伤过程的作用与机制，为该方剂的推广应用提供科学依据，也有望为急性肾损伤防治提供新的理论和思路。 三、主要论点与论据：1.桂枝去桂加茯苓白术汤能明显改善缺血再灌注所致的肾组织结构损伤，促进肾脏功能恢复。1)动物活体实验发现，桂枝去桂加茯苓白术汤能改善肾脏缺血再灌注大鼠的生存状态，减轻肾组织病理结构损害，降低血清Cr与BUN水平。2)肾小管细胞实验发现，桂枝去桂加茯苓白术汤能促进缺氧复氧细胞增殖，减少其凋亡。2.桂枝去桂加茯苓白术汤通过上调miR-21表达减轻缺血再灌注性肾损伤，其作用通路与TNF-α/NF-κB/caspase-3、caspase-8有关。1)动物活体实验发现，桂枝去桂加茯苓白术汤能上调缺血再灌注肾组织miR-21表达，减少肾组织TNF-αmRNA、NF-κB、caspase-8蛋白质的表达。2)肾小管细胞实验发现，桂枝去桂加茯苓白术汤能上调miR-21表达，抑制缺氧复氧细胞NF-κB、caspase-3蛋白质表达，阻断细胞miR-21后，该方剂的肾保护作用消失，对NF-κB、caspase-3蛋白质表达抑制解除。 四、创见与创新：1.明确桂枝去桂加茯苓白术汤的抗肾缺血再灌注性肾损伤作用，促进缺氧复氧肾小管细胞增殖，减少其凋亡。2.证实桂枝去桂加茯苓白术汤对缺血再灌注肾损伤的保护作用通过miR-21调节TNF-α/NF-κB/caspase-3、caspase-8等因子实现。3.改良的背入式腹膜后夹闭双肾蒂模型制作方法操作简便，切口不易污染，效果稳定。 五、社会经济效益，存在的问题：1.社会经济效益1)背入式腹膜后夹闭双肾蒂复制肾IRI模型，动物存活率高，切口不易污染与受刺激，肾脏功能和组织结构受损明显，预示这种模型制作方法符合科学研究要求，该方法有推广应用价值。2)该研究明确了桂枝去桂加茯苓白术汤通过miR-21/TNF-α/NF-κB/caspase-3/caspase-8产生抗损伤的作用效果与机制，为该方剂防治缺血性急性肾损伤提供了科学依据。桂枝去桂加茯苓白术汤组分药物价格低廉，应用于防治可能出现缺血性肾损伤的患者，将改善患者的肾损伤预后，减轻患者及社会的医疗负担。3)该研究也证实，miR-21的表达升高，可促进肾组织细胞的结构与功能恢复，提示miR-21可能作为肾损伤的潜在治疗靶点。2.存在的问题该项目研究的是桂枝去桂加茯苓白术汤复方制剂的肾保护作用，由于复方制剂成分相对复杂，尚不能明确产生治疗作用的最主要成分，需进一步深入探索各组分单体的作用，以期筛选出精确有效成分，为中医药标准化治疗提供依据。