[01597982]新型辣根过氧化物酶底物及免疫传感分析新方法研究

酶联免疫分析(Enzyme-linkedimmunoassays，ELISA)将酶催化放大效应与免疫反应高特异性结合，具有分析灵敏度高、选择性好等特点，在实际中已获得了广泛的应用。该方法的检测灵敏度、精确性等性能很大程度取决于酶底物的性质。因此，研究开发水溶性好、性质稳定、酶催化效率高和毒副作用低的新型酶底物对发展新型酶催化反应体系和高灵敏度的酶联免疫分析新方法具有重要意义。该项目在辣根过氧化物酶(Horseradishperoxidase，HRP)底物及其酶鞋免疫传感分析应用方面开展了有效研究，取得了系列重要成果。以植物抗氧化剂为研究对象，筛选出了植物多酚类、黄酮甙类HRP底物，诸如白藜芦醇、对羟基桂皮醇和葛根素HRP底物等；根据底物特性分别建立了基于荧光和电化学测定的酶催化反应体系和酶联免疫传感分析新方法；从植物色素中筛选出了矢车菊甙类HRP底物，运用该底物建立了基于紫外-可见光谱测定的酶联免疫传感新方法；根据HRP底物结构要求设计合成了吡啶衍生物类荧光底物，建立了基于吡啶衍生物类荧光底物的酶反应体系和布氏杆菌抗体酶联荧光免疫传感测定新方法；将氯丙嗪药物用作HRP酶底物，建立了用于转铁蛋白测定的酶联荧光免疫新方法。开发的新型底物克服了传统HRP底物酶催化反应速率不高、水溶性差、不稳定和具有毒副作用等不足；建立了以长春西汀酸为标记物的荧光偏振免疫分析新方法。该项目首次以天然活性成分白藜芦醇、对羟基肉桂醇作为HRP酶底物建立酶反应体系和将白藜芦醇、对羟基肉桂醇用于酶联荧光、电化学免疫传感技术；首次利用植物色素-矢车菊素-3-葡萄糖苷建立酶联紫外-可见酶反应体系，并将之应用于酶联紫外-可见免疫传感分析中。此外，该项目还研究开发了以卟啉衍生物为超分子识别元件的苯硫丙咪唑和青蒿素药物传感器。开发的新型HRP底物丰富了HRP底物种类，为发展新型高灵敏酶联免疫传感分析方法提供了更多更好的底物选择。同时，该项目研究思想为开发新HRP酶底物提供了新思路。该项目获得了系列成果，相关研究论文分别发表在中国科学、化学学报、Talanta、SensorsandActuators、BiosensorsandBioelectronics和Sensors等国内外著名期刊上，所报道成果得到了同行较高评价，相关论文共下载300多人次，被引用近100人次。