[01603680]新型生物材料及技术的研究与应用-柯萨奇B组病毒新型诊断试剂盒研制及临床应用研究

1、项目来源：吉林省科学技术厅；合同编号：20050404-5　　2、应用领域：病毒性疾病的检测及诊断 　　技术原理：利用计算机GCG软件将CAV和CBV的全基因序列进行比较分析，建立酶切位点库，再设计出与其相同的保守c-DNA片段合成引物，并对该片段中不同型别的特定限制性内切酶位点进行定位，然后将特定的c-DNA片段进行酶切消化，最终通过对被消化后病毒核酸c-DNA的凝胶电泳分析，对CAV和CBV不同型病毒进行准确的鉴别和分型。　　3、性能指标：我们利用GCG计算机软件系统，建立了CBV完整的限制性内切酶酶切位点库；筛选出了用于对柯萨奇B组病毒进行分型的最佳引物；采用RT-PCR法获得了柯萨奇B组病毒特异片段cDNA及克隆菌株；采用PCR方法进行柯萨奇B组病毒特异片段cDNA的扩增；然后利用对鉴别柯萨奇B组1-6型病毒具有重要意义的5种限制性内切酶对所获得的目的 cDNA进行酶切消化；将酶切后产物的电泳图谱和柯萨奇B组1-6型病毒的酶切图谱进行分析和对比，即可对感染病毒的型别进行鉴定。最后定型了试剂盒的实验室产品。以上均按合同要求完成。　　4、与国内外同类技术比较：国内外未见同类产品在柯萨奇B组病毒性疾病诊断中应用的报道，所以，这种方法无论是在目前的柯萨奇病毒检测工作中，还是在将来的病毒学研究中，都将具有举足轻重的地位和广阔的发展前景。　　5、成果的创造性、先进性：本研究在国内外首次利用GCG软件设计将目的c-DNA的检测与限制性内切酶分析相结合的方法应用于病毒性疾病的临床诊断。它既综合了常规RT-PCR的优势，又解决了常规RT-PCR技术中非特异性高的难题，为多型别病毒性疾病的准确诊断提供了一种可靠的手段　　6、作用意义：本试剂盒建立，不仅为常规和疑难柯萨奇B组病毒性疾病的临床诊断提供必要的依据，同时也为其它病毒性疾病的临床诊断开辟了新途径，如规模化生产，可以创造可观的社会效益和经济效益。　　该项目研究建立的试剂盒可以应用到临床医院以及相关的科研单位，由于该诊断技术与传统方法比较，具有准确率高、重现性好、没有非特异性反应等优点，所以该方法的建立与应用，将为病毒性疾病的病原学研究及病毒性疾病的治疗和预防提供理论与实践依据，因而具有很好的应用前景。