[01615581]鳖甲活性肽的追踪分离和构效关系研究

①课题来源与背景：中药鳖甲为鳖科动物中华鳖(Trionyx sinensis)和山瑞鳖(T.steindachneri)的背甲，始载于《神农本草经》，有滋阴清热、平肝、潜阳、软坚散结的功效，临床用于治疗阴虚发热、劳热骨蒸、虚风内动、经闭等症。该药材含有多种类型的化学成分，其中寡肽类成分是鳖甲发挥功效的有效物质。现代药学研究扩大了鳖甲的应用范围，人们认识到在传统功效之外鳖甲的药用价值，而肽类成分自身的功能多样性同样值得进一步探讨。 ②研究目的与意义：鳖甲蛋白酶解物中可能存在多功能肽，对其展开进一步分离纯化，从中获得有效肽分子，从新的角度挖掘鳖甲的药用价值，也为疾病治疗提供更多候选有效单体。 ③主要论点与论据：对鳖甲肽类组分的酶法提取工艺进行研究，以提取率和ACE抑制活性为评价指标筛选了合适蛋白酶，通过单因素实验和响应面法优化了酶法提取工艺条件。对鳖甲蛋白质酶解物的肽类成分进行了筛选分离研究，从中获得并鉴定了两个ACE抑制肽，二者均为新发现的ACE抑制肽。运用酶抑制动力学法、紫外光谱法、荧光光谱法、等温滴定量热法(ITC)和分子对接法对活性肽与ACE的相互作用展开了多方面分析，表明二者均为非竞争性抑制肽。 ④创见与创新：以ACE抑制活性为指标对鳖甲蛋白质进行酶法提取，优化酶法提取工艺。从鳖甲蛋白酶酶解物中获得并鉴定了两个新的ACE抑制肽。采用酶抑制动力学实验、ITC实验、光谱法和分子对接法从不同角度分析探讨了活性肽与ACE的作用机理，用不同方法互相验证了活性肽与ACE的相互作用过程中产生的变化。 ⑤社会经济效益，存在的问题：该课题以ACE抑制活性研究为突破口，结合鳖甲的临床功效，从新的角度挖掘鳖甲的药用物质基础，探索了鳖甲新的药用价值，为其医药用途范围的扩大开发奠定了相关理论和实验基础；采用不同方法分析了活性肽与ACE的相互作用，为ACE抑制剂的抑制机理研究提供了可参考依据，有利于ACE抑制剂类药物的创新研发，同时为酶抑制动力学法、ITC法、光谱法和分子对接法在酶抑制机制研究中的综合应用积累了实验经验。依托该项目，培养了本科生4名，均顺利通过本科学位论文答辩，协助培养硕士研究生1名，学生均较好地完成了相关实验和论文并通过论文答辩，实践了人才培养目标。 ⑥成果简介：该课题对鳖甲肽类组分的酶法提取工艺进行了研究，以提取率和ACE抑制活性为评价指标筛选了合适的蛋白酶，通过单因素实验和响应面法优化了酶法提取工艺条件。对鳖甲蛋白质酶解物的肽类成分进行了筛选分离研究，从中获得并鉴定了两个ACE抑制肽，二者均为新发现的ACE抑制肽。运用酶抑制动力学法、紫外光谱法、荧光光谱法、等温滴定量热法(ITC)和分子对接法对活性肽与ACE的相互作用展开了多方面分析，表明二者均为非竞争性抑制肽。该课题的实施从新的角度探讨了鳖甲的药用价值，为其医药用途的进一步拓宽开发奠定了相关研究基础，也为ACE抑制剂类创新药物的开发奠定了相关理论实验基础。依托该课题，青年教师的科研能力得到培养提高，促进了青年教师科研团队的协调发展，同时完成了人才培养任务，协助培养硕士研究生1名，培养本科学生4名，学生的学位论文均顺利通过答辩，成绩良好。在该课题资助下，共发表论文2篇，其中1篇发表在SCI期刊，1篇发表在中文核心期刊。