[01622524]EBV潜伏膜蛋白2A激发DC诱导抗鼻咽癌免疫功能及其疫苗的研究

EB病毒（Epstein-Barr,EBV）属DNA嗜B淋巴细胞疱疹病毒4型。已知它与人类多种恶性肿瘤相关。EBV相关鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC）是一种常见的EB病毒相关的上皮来源的恶性鳞状上皮癌,易发生远处转移。临床上主要靠早期诊断、放疗化疗。树突状细胞（dendritic cell,DC）是功能最强的抗原提呈细胞,在机体识别肿瘤抗原及激发特异性抗肿瘤的免疫中起关键作用。 90年代中期在国内首先建立了高效、简便的DCs培养系统,在体外诱导成功并获得大量成熟的人外周血单核细胞及人脐带血单核细胞来源的DCs,建立了PBMCs和CBMC液氮长期保存和复苏的条件与方法的平台,以利于DCs的快速体外扩增,并且同时对DCs的免疫功能及疫苗的研制和临床观察进行了探讨。 本项目以DCs为抗原递呈细胞（APC）,选用EBV潜伏膜蛋白2A（LMP2A）为靶抗原,用RT－PCR技术成功克隆出EB病毒B95.8原型株LMP2A的cDNA,测序比对结果一致。成功构建EBV-LMP2A基因重组腺病毒和痘苗病毒载体,转染成熟DCs,激发特异性CTL,对EBV-LMP2A转染的靶细胞有杀伤效应。又进一步根据NPC患者常见的HLA型别（以HLA-A2为主）,采用生物信息学方法,利用三种不同的计算机软件分析LMP2A蛋白全序列,鉴定了3条LMP2A特异性CTL多肽表位,其中表位QLS为国际上首次鉴定出的LMP2A表位。建立了3株多肽特异性T细胞克隆,并对其表型和功能作了分析。为了增强LMP2A肽疫苗的效果,又克隆和纯化MtHSP70,并建立了表位肽疫苗体内研究的转基因动物模型,其中负载重组人HSP70多肽复合物的树突状细胞疫苗,制备方法和应用于获得一项专利（2010.7.21）。将筛选出针对EBV-LMP2A抗原的特异性T细胞受体TCR 基因疫苗,并设计以CD3分子ζ链联合针对EBV 抗原的TCR 基因作为免疫源转染T淋巴细胞,提高TCR疫苗的效能,为基因治疗提供新的思路。又将李斯特菌载体应用于EBV相关的鼻咽癌治疗中,成功构建EB病毒LMP2A核苷酸序列转化减毒李斯特菌,制备的疫苗显示出良好的抗肿瘤效应。同时,深入阐明鼻咽癌转移机制,对EB病毒激活介导的EMT促进肿瘤侵袭转移的调控网络及免疫机理进行研究,将可能对鼻咽癌预防、治疗提出新的思路和操作切入点,具有重要的理论和临床意义。