[01642588]以erbB-2受体为靶向的活化T细胞的抗肿瘤基因治疗研究

简要技术说明： 该项目在保证scFv基因治疗优点的基础上,用基因工程的方法改造anti-erbB2-scFv基因结构。首先构建（分别采用了两种构建方案）融合基因signal-anti-erbB2-scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）,然后与逆转录病毒表达载体pLNCX连接形成重组载体,克隆,鉴定。电转染法转染T细胞株及原代T淋巴细胞,检测融合基因表达。最后检测嵌合锚定T细胞对erbB-2阳性肿瘤细胞的结合情况和杀伤作用,以及嵌合锚定T细胞被活化的情况。 该项目应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核细胞表达载体pLNCX/anti-erbB2scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）,融合基因能够在T淋巴细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过度表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了实验基础。将上述第二种方案构建的含融合基因anti-erbB-2scFv-Fc-CD28-ζ的重组真核细胞表达载体电转染外周血T细胞并且经G418筛选后检测。在转染的外周血T细胞的细胞膜表面表达的anti-erbB-2能够靶向结合erbB-2阳性乳腺癌细胞（体液免疫）,同时在转染的外周血T细胞的细胞膜内侧表达的外源CD3（ζ）能够促使外周T分泌更多的免疫因子（细胞免疫）,即转染的外周血T细胞能够同时发挥细胞免疫和体液免疫的双重作用来杀伤erbB-2阳性乳腺癌细胞。 应用前景： 研究表明,约30%-50%的乳腺癌患者c-erbB-2癌基因过表达,c-erbB-2过表达的乳腺癌患者化疗及内分泌治疗效果不佳,且倾向于早期复发,生存期缩短,这种基因过表达对乳腺癌患者极为不利。我们的抗erbB-2scFv-Fc-CD28-ζ融合基因T细胞的构建及表达的研究成果除适用于erbB-2高表达的乳腺癌外,也适用于erbB-2高表达的卵巢癌、结直肠癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、非小细胞肺癌和鼻咽癌等肿瘤。 用重组单克隆抗体基因进行肿瘤的基因治疗将把单克隆抗体生物治疗技术推向一个崭新的阶段,这种基因治疗目前已在发达国家的各大医疗中心作广泛的临床试验,前景诱人。本项目的进一步研究突破,将会使我省的肿瘤治疗水平与世界先进水平同步,造福于千百万的肿瘤患者,同时也会取得巨大的经济效益。