[01747989]电针联合BMSCs移植对MIRI大鼠心肌保护作用及机制研究

通过建立心肌缺血再灌注损伤（MIRI ）大鼠模型,观察电针诱导的骨髓间充质干细胞（ BMSCs）移植对MIRI大鼠的心脏保护作用,探讨其对MIRI大鼠血管新生的动态影响和作用机制。采用全骨髓贴壁法分离、传代大鼠BMSCs,倒置显微镜下观察细胞生长形态,MTT法检测细胞增殖情况,绘制生长曲线,流式细胞仪对BMSCs表面抗原（CD29、CD45、CD90）进行鉴定,为下一步实验研究提供实验材料。我们通过制备MIRI大鼠模型,动物随机分为假手术组、模型组、电针组、BMSCs组、电针+BMSCs组,假手术组只结扎不穿线,模型组、电针组采用心肌内直接注射的方法,注射生理盐水;BMSCs组、电针+BMSCs组将BMSCs移植到梗死边缘区;分别在移植3d、7d、14d三个时间点,采用生化仪对心肌酶CK-MB、cTnI含量进行测定,TTC染色法测定大鼠心肌梗死面积,光镜下观察心肌病理形态学改变,电镜下观察心肌超微细结构,荧光标记观察BMSCs增殖情况。免疫组化法检测心肌组织CD31、SDF-1、VEGF、TGF-β1蛋白表达;Western blot 法检测Ang-1、bFGF蛋白表达;PCR法检测VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA表达。 结果： 1、倒置显微镜显示细胞增殖较为活跃,细胞增大,形状以梭形、多角形及星形为主,形态呈“旋涡样”,MTT显示细胞生长曲线呈S形,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原CD45阳性率小于5%,CD29和CD90阳性率大于90%,表明细胞纯度较高、均一性良好。 2、再灌注后,随着时间的延长,各个治疗组均能够降低大鼠心肌酶CK-MB、cTnI及心肌酶的水平,电针＋BMSCs组效果最显著（p＜0.05）;病理形态学显示电针联合BMSCs移植能够减少炎性细胞浸润,改善心肌纤维紊乱;超微细结构显示电针联合BMSCs移植能够明显改善心肌线粒体损伤;荧光标记显示BMSCs移植后,随着时间的延长,BMSCs在心肌内生长增殖,其中电针诱导组效果显著。 3、免疫组化染色后CD31、SDF-1、VEGF、TGF-β1均呈“棕黄色或黄褐色”即阳性表达,新生血管呈棕黄色。各个治疗组CD31、SDF-1、VEGF的蛋白及VEGF mRNA表达明显高于模型组（P＜0.05）,电针＋BMSCs组治疗效果明显优于其他治疗组（P＜0.05）;随着时间延长,各治疗组TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA呈现逐渐降低的趋势;与再灌注3d比较,7d、14d时各治疗组TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA水平明显降低（P＜0.05）;与再灌注7d比较,14d时电针＋BMSCs组TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA水平明显降低（P＜0.05）;Western blot 法结果显示与假手术组、模型组比较,各治疗组Ang-1、bFGF蛋白水平显著升高（P＜0.05）,其中以电针＋BMSCs组疗效更为显著（P＜0.05）。