[01752822]乳品安全生产关键菌控制快速检测技术研究

一、课题来源与背景 由吉林省科技厅吉林省科技发展计划项目资助,吉林工商学院承担的“乳品安全生产关键菌控制快速检测技术研究”项目的科研任务,经过三年的研究现已完成了合同规定的相应任务和技术指标。 牛奶营养丰富,是人类的理想食品之一,随着人们对乳制品品质要求的不断提高,致病菌危害逐渐被学者及广大消费者所重视。因此,乳品中的致病菌含量是衡量乳品质量的重要依据。原料乳的细菌总数是衡量原料乳品质的重要指标,对乳制品的生产和质量监控有着重要的指导意义。一般现场收购鲜奶的细菌学检验按国标进行,但需时24小时以上,不符合实际需要;国标法虽然准确,但耗时较长,需2-5天,而现有快速方法成本则太高,因此,为解决企业关键难题,推动乳品企业快速发展,迫切需要建立适应乳品企业生产安全快速评价方法。关于细菌快速检测技术有PCR检测技术、酶联免疫分析技术等。与传统方法相比,分子生物学和免疫学检测技术具有快速、灵敏、高效等特点。本研究从食品卫生安全学的一个重要方面即细菌污染情况来了解当前吉林省地区原料乳及市售的胀袋变质乳的卫生安全状况,目标是建立乳品快速检测方法,实现简单、快速、敏感、高效的乳品危害菌快速检测,满足乳品企业安全乳品生产需求。 二、技术原理及性能指标 技术原理：分析确定鲜乳中危害菌菌谱,以细菌16S rRNA作为广谱检测目标物,建立实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测细菌总数快速检测方法;对加工乳中常见芽胞杆菌（或酵母菌）进行分析,选定主要或常见菌种免疫动物获得多克隆抗体,以此抗体为基础建立ELISA免疫学快速检测方法,实现简单、快速、敏感、高效的乳品危害菌快速检测,满足安全乳品生产需求。 1.设计不同菌的16SrRNA和18S rRNA,对鲜乳污染细菌的分离与鉴定; 2.建立鲜乳中细菌总数的荧光定量PCR的检测方法; 3.验证鲜乳细菌总数荧光定量PCR检测方法的准确性; 4.建立乳品中污染酵母菌ELISA检测方法; 5.基于GFP标记的鲜乳致病菌检测。 性能指标： 1.获得新鲜乳品污染的常见细菌谱; 2.建立乳品细菌总数的荧光定量PCR快速检测方法; 3.建立乳品酵母菌的ELISA快速检测方法; 三、技术的创造与先进性 1.以细菌16S rDNA作为广谱检测目标物,建立了乳中细菌总数实时荧光定量PCR检测方法,可以一次测量大量样品,可用于乳中细菌总数的定量快速检测,时间缩短至3-4h。 2.建立了乳品中污染酵母菌ELISA方法,时间缩短至3-4h。 3.构建了重组工程菌GFP-STEC,可用于原料乳产肠毒素型大肠杆菌的检测。 综上,项目在乳品快速检测方面达到了国内领先水平。 四、技术的成熟程度,使用范围和安全性 分析了确定了鲜乳中危害菌菌谱,以细菌16S rRNA作为广谱检测目标物,建立了实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测细菌总数快速检测方法;对加工乳中常见酵母菌进行分析,选定主要或常见菌种免疫动物获得了多克隆抗体,以此抗体为基础建立了ELISA免疫学快速检测方法,实现了简单、快速、敏感、高效的乳品危害菌快速检测,满足安全乳品生产需求。建立的快速检测方法,节省检测时间,提升产品品质,提高生产效率,降低生产成本,适合企业推广应用,在乳品检测方面取得一个重大突破,同时也为其他食品快速检测提供借鉴作用。 五、应用情况及存在的问题 课题研究成果现已申请专利一项,是一项新技术。目前建立的检测方法研究成果正在合作企业“广泽乳业有限公司”进行应用,同时进行推广应用。同时正在进行配套试剂盒开发及关键技术研发尽,尽快开展试剂盒生产试验及推广应用。 存在问题是推广应用到液态乳的各种产品,需要大量生产试验,需要资金支持。 六、历年获奖情况 该项目尚未获奖