[01805704]刺五加注射液的致敏物质基础及致敏机制研究

(1)课题来源与背景 本课题属于黑龙江省教育厅科学研究项目。中药注射剂（TCMI）在心脑血管、病毒与细菌感染、肿瘤等疾病的治疗方面发挥着重要的作用。目前,TCMI产业年销售额超过200亿元,每年有4亿人次使用TCMI。然而,TCMI在发挥治疗作用的同时,也带来了不少安全性问题,其中尤以过敏反应突出。究其原因是,很多TCMI致敏物质基础不清、致敏机制不明,并缺乏快速有效的致敏物质筛选方法,从而导致TCMI在生产过程中无法有针对性的将致敏物质除去,在质量控制过程中也无法制定致敏物质的限量标准,不能有效保障产品用药安全性。 （2）研究目的与意义 建立灵敏度好、准确率高的致敏物质筛选方法,探索有效的致敏物质基础和致敏机制的研究方法成为TCMI临床前安全性评价亟待解决的关键问题,并具有重要的科学价值。 （3）主要论点论据 本研究选择以过敏反应文献报道较多的黑龙江地产TCMI大品种-刺五加注射液为中药注射剂致敏性物质筛选的研究对象,重点对刺五加注射液的致敏性类型、围绕其致敏物质基础及致敏机制进行了研究,主要开展了以下2部分研究工作： ①刺五加注射液过敏反应类型的认定 本研究为探讨中药注射剂的致敏反应类型,以建立中药注射剂致敏物质筛选方法,寻找防治中药注射剂不良反应的途径和方法,通过建立适合于中药注射剂的敏感度好、准确率高的致敏物质筛选方法,对其致I型过敏反应或类过敏反应进行认定,分别采用同种大鼠被动皮肤过敏试验、总IgE水平测定试验、豚鼠行为学观察试验和致大鼠组胺释放试验,认定刺五加注射液的急性过敏反应类型,为进一步筛选其致敏物质奠定基础。 ②刺五加注射液致敏物质基础及致敏机制研究 本研究从刺五加注射液本身的物质组成出发,暂不考虑特异性体质、联合用药等因素。首先筛查刺五加注射液中间体当中的大分子物质,并对各类存在的大分子物质进行致敏性研究。通过抗原抗体反应原理,采用Western blotting实验对刺五加总蛋白的免疫原性进行研究,将目的蛋白条带进行质谱检测,并从基因库中寻找已知蛋白;刺五加注射液的组分为刺五加苷、异嗪皮啶等均是小分子量的化合物,但不能排除刺五加注射液小分子物质作为过敏原存在的可能性。为考察刺五加注射液小分子致敏原存在的可能性,本实验采用物理孵育法制备刺五加-BSA偶联物,并以此为受试药物建立动物过敏模型,ELISA法检测总IgE水平,IL-4水平、IFN-γ水平,电子显微镜下观察致敏豚鼠肺部及支气管的病理变化,考察刺五加注射液中小分子物质的致敏潜力。 通过对刺五加中间体-刺五加提取液中大分子物质的初步检测发现刺五加提取液中主要含有蛋白和多糖两类大分子物质,通过对大分子物质的致敏性研究发现,刺五加总蛋白提取物可引起致敏豚鼠的血清中的总IgE、IL-4及IFN-γ水平与生理盐水组比较有统计学意义,病理切片结果显示豚鼠肺部出现肺泡腔内有液体渗出,肺水肿形成,细支气管腔内有液体渗出,细支气管上皮脱失,因此,刺五加注射液的过敏反应可能是这些大分子的蛋白类化合物与机体相互作用而导致的。使用偶联物建立过敏模型,致敏后豚鼠的血清中的总IgE、IL-4及IFN-γ水平与生理盐水组比较有统计学意义,病理切片结果显示偶联物组豚鼠肺部出现肺泡腔内有液体渗出、肺组织实变,肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡腔内有液体渗出,肺水肿,细支气管腔内有炎性渗出;而生理盐水组肺泡壁毛细血管无明显充血,肺泡腔内无液体渗出。因此,物理孵育法制备的刺五加-BSA偶联物能够致敏豚鼠。 （4）创见与创新 本研究建立了中药注射剂急性过敏反应类型的认定及致敏性物质筛选方法,初步确定了刺五加注射液的过敏反应类型及过敏性成分归属,并对刺五加注射液的致敏机制进行了研究,为刺五加注射液的原料药材及成品的质量标准研究提供参考,同时探索了中药注射剂致敏性研究思路,为中药注射剂的临床前安全性评价及我国现行TCMI的再评价及新药的研发都具有重大的经济和实用价值,为中药注射剂的安全性评价方法学研究提供新的思路和实验依据。 （5）社会经济效益 刺五加注射液（CWJI）为五加科植物刺五加的茎经水醇法提取精制而成的灭菌溶液。系黑龙江地产TCMI大品种主要由哈尔滨珍宝制药有限公司、完达山制药厂、乌苏里江制药有限公司、多多药业等企业生产,是年产值近3个亿的中药注射液大品种。然而,近年来,刺五加注射液的安全性问题,却引起了了政府、企业、医生、患者以及社会其他人员的质疑和广泛关注。整个刺五加注射液产业的发展面临着严峻的挑战,甚至有被市场淘汰的危险。因此,为了保障刺五加注射液用药的安全性,亟需对刺五加注射液致敏物质基础及致敏机制进行系统研究。本课题的研究结果可为刺五加注射液的工艺优化、质量控制提供依据,从而提高刺五加注射液产品质量和用药安全性;也可为中药注射剂安全性评价提供新的研究思路,推广应用于其他品种中药注射剂的安全性评价研究中。