[01920655]一种基于CRISPR/Cas9技术介导绒山羊VEGF基因定点敲入的方法
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所在地：内蒙古自治区呼和浩特市
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技术详细介绍
本发明利用CRISPR/Cas9系统介导完成绒山羊VEGF基因定点敲入,其是依据绒山羊的CCR5基因序列,构建基于CRISPR#Cas9系统的gRNA表达载体及VEGF同源重组载体。然后将优化后的三种载体共同转入绒山羊胎儿成纤维细胞中,获得VEGF基因定点敲入的阳性细胞。利用体细胞核移植技术制备VEGF基因定点整合绒山羊。本发明所构建的基于CRISPR/Cas9系统的打靶载体为山羊VEGF基因的定点敲入提供了一种简单快捷安全的途径。该方法在细胞系筛选过程中没有涉及任何筛选标记基因,从而大大提高了转基因动物的安全性,对绒山羊的遗传育种以及基因功能的研究具有重要价值。