[00365455]复式PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫系统

本课题由江苏省卫生厅资助，偏号H9733及中国核工业总公司赞助。 疟疾仍是全球最重要的公共卫生问题之一，我国虽已控制了大面积暴发流行但造成疟疾流行的基本因素和点状暴发流行依然存在，疟疾诊断仍沿用一百多年来的血涂片显微镜检查，已不能适应当前的需要，聚合酶链反应(PCR)是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，经酶促反应快速将靶DNA序列扩增数百万倍，具有高度的敏感性和特异性等优点，本复式PCR是首次将恶性疟原虫(p.f)中度重复基因序列PBRK1-14与间日疟原虫(p.v)线粒体细胞色素C氧化酶基因组合而成，能将p.f扩增出206bp及p.v扩增出370bp条带； 本复式PCR有多项创新，为将p.f基因PBRK1-14和p.v基因CDⅢ组合成复式PCR创用生理盐水溶血煮沸法处理滤低干血滴样本制备疟原虫DNA模板，探索最佳反应体系进行有效扩增，提高敏感性，采用固相试剂保存法，可在4℃-8℃中保存一年，解决了检测试剂盒贮运等一系列问题，本技术已经成熟适用于疟疾流行病学调查疫情监测，抗疟效果配核，献血筛选和疟原虫虫种鉴定等。