[00648176]青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A重组蛋白单克隆抗体试剂盒的制备及应用

单克隆抗体血清学检测技术现已成为诊断动物多杀性巴氏杆菌病的重要研究方向，特别是在检测潜伏感染及健康带菌畜禽多杀性巴氏杆菌病方面具有独特的优势。已有禽霍乱、猪肺疫商品化的检测试剂盒，但尚未见到牦牛出败的检测试剂盒。 为此，该项目以牦牛源Pm临床分离株为靶细菌，进行了Pm OmpA抗原制备、BALB/C小鼠的免疫、阳性杂交瘤细胞株的筛选、Pm OmpA单克隆抗体(MAb)的纯化与检测。制备抗OmpA的MAb用于融合的小鼠在三免后效价＞256K，适于融合且效价为免疫小鼠中效价最高的。将免疫的BALB/c小鼠脾细胞和Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合后经亚克隆筛选获得单克隆细胞株5株(分别命名为1C4、2C6、3E3、4D6、5B6)，经ELISA 及Western-blot检测法可确定其中4D6为目标杂交瘤细胞株。由细胞株4D6所制备的腹水纯化后得到的抗体的效价≥5W，单克隆抗体杂交瘤细胞抗体效价为1：51200。因Pm OmpA重组蛋白DNA疫苗对小鼠可提供70%的免疫保护力。 研究成果表明，在此基础上研制单克隆抗体试剂盒可显著提高诊断的特异性和一次性检测的样本量，适宜在基层推广应用。成果达到国内领先水平。