[00678255]人ZP3的精子结合位点及其相关表位的研究
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技术详细介绍
为分析hZP3的精子结合位点设计了4个hZP3的测试肽段，构建了hZP3及其4个肽段的表达载体，并分别用于细菌、酵母和昆虫细胞中表达。用重组hZP3制备抗血清，并用于分析4个hZP3的肽段与人精卵结合的关系。用免疫细胞化学方法检测到hZP3的C端肽段与精子表面的结合，但是用原子力显微镜并未观察到hZP3肽段与精子表面蛋白的结合。用酶标抗体检测到固相化的各测试肽段与抗rhZP3抗体的特异结合。在昆虫细胞中表达的hZP3的B细胞表位嵌合肽有一定的免疫源性，抗血清能与天然人卵巢透明带结合。显示hZP3的精子受体位于其C末端，C端的一肽段有一个B细胞表位。建立了分离小分子肽的Tricine-SDS-PAGE方法；建立了用原子力显微镜观察精子表面结构的方法。两项发明专利获授权。