[00718230]葡萄扇叶病毒检测技术研究
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技术详细介绍
该成果包括两项技术，分子探针技术和血清学ELISA技术。cDNA探针检测技术亦称分子杂交技术，是以核苷酸碱基配对为基础，其检测灵敏度可达Pg水平。技术内容包括：毒源扩繁、病毒提取、引物合成、模板RNA提取、以PCR法合成葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因cDNA，cDNA与质粒重组及重组质粒的转化、获得高效克隆、生物素记cDNA探针制备以及采用硝酸纤维膜上点杂交检测葡萄扇叶病毒。血清学ELISA技术是抗原、抗体的免疫反应与酶促反应相结合，通过酶与底物的作用显示出抗原与抗体的结合，因而要比其它血清学方法的灵敏度高，检测灵敏度可达ng/mi水平。技术内容包括：毒源繁殖、病毒提纯、抗体制备(包括免抗血清制备和小鼠腹水抗体制备)抗原均以福氏佐剂乳化，免疫全程一个月，免疫周期每周一次，全程共四次，小鼠腹水抗体制备第四次免疫后注射癌细胞诱发腹水产生。该研究采用异种动物双抗体间接法检测葡萄扇叶病毒。