[00718299]伤寒沙门菌质粒pRST98的研究

伤寒沙门菌引起的人类伤寒目前在发展中国家仍然是一种非常重要的传染病，世界上每年仍有100万例伤寒沙门菌引起的伤寒热病例，其中死亡人数超过60万。八十年代中后期，中国十三省市发生了大规模多重耐药伤寒的严重流行。课题组对1987-1992年苏州地区连续六年收集的591株伤寒沙门菌进行耐药性监测，经药敏试验、质粒电泳、接合转移和消除试验证明，流行期间分离的多重耐药菌株均含一个分子量为98.6Md(155Kb)的耐药质粒(R plasmid)，可编码对多种药物的抗性，属IncC群，称之为pRST98。该项研究对中国耐药伤寒沙门菌流行期间分离的质粒pRST98进行了系统的研究。结果表明：1.在实验室中伤寒沙门菌较易将其pRST98传递给大肠杆菌，接受了耐药质粒的大肠杆菌又可将pRST98传递给其他肠道致病菌。野生型大肠杆菌中不同群的R质粒也可直接传递至敏感伤寒沙门菌，但在不同宿主菌中同一R质粒接合传递的难易程度不同，表达的耐药标志也有差异。2.用9种限制性核酸内切酶对pRST98进行质粒酶谱分析，结果表明内切酶BglⅡ，EcoRⅤ，PstⅠ和SacⅡ是对该质粒进行分子生物学、分子流行病学研究的理想工具。pRST98限制性核酸内切酶谱的建立，为该质粒的基因型提供了重要的分子标记。3.从临床分离的大肠杆菌和耐药伤寒流行时分离的伤寒沙门菌耐药谱相似，与pRST98同属IncC群可传递性质粒，限制性核酸内切酶图谱也非常相似，从而提示伤寒沙门菌IncC群耐药质粒pRST98有可能来源于大肠杆菌等肠道菌群。4.选用中药双黄连和氧氟沙星对伤寒沙门菌pRST98进行消除试验，虽未能将pRST98消除，但该质粒编码的耐药标志减少，部分菌株对原有药物的MIC亦明显下降。5.将pRST98通过接合转移导入鼠伤寒沙门菌感染小鼠后发现，该质粒能增强细菌的毒力，使宿主菌对小鼠的LD50降低；感染小鼠后肠系膜淋巴结、肝脏和脾脏菌量明显增加并出现严重病理改变；携带pRST98的伤寒沙门菌在血清中的抗性显著高于无此质粒的菌株，其抵抗巨噬细胞吞噬杀伤和在细胞中生存的能力明显增强。6.PCR、Southern Blot和核酸测序结果显示，伤寒沙门菌质粒pRST98上亦有其他沙门菌毒力质粒上高度保守的序列-spv的同源序列，其spvR和spvB与鼠伤寒沙门菌毒力质粒上spv的同源性超过99%，从而在国内外首次从核酸水平证实伤寒沙门菌质粒pRST98是一种多效的“嵌合型”质粒。