[00720219]酶联杂交基因诊断试剂盒生产技术

该项目建立了一套检测PCR扩增结果的酶联免疫模式化的核酸探针检测技术，形成了成熟的检测试剂盒，可以使检测结果达到理想的准确度。首先通过固相生物交联技术，使氨基标记的(+)链探针与预先包被于聚苯乙烯微孔板上的桥梁蛋白质之间相交联，形成蛋白质DNA交联物，从而形成固相化的核酸探针。在扩增用的(-)链引物的5′端预先进行生物素(Bio)标记，再用该引物进行PCR扩增。将病原菌的特异性保守区段用PCR扩大增放大约100万倍，扩增产物中的(-)链DNA片段上均带有Bio标记。扩增产物变性后，其5′-Bio(-)链DNA在微孔板中与互补的(+)链探针进行特异性杂交，形成的固相杂交体上均带有Bio标记。加入亲和素标记的辣根过氧化物酶(av-HRP)，通过亲和素与杂交体上物生素的高效率特异性结合从而将辣根过氧化物酶也固定在载体上。最后加入可以被该酶催化而发生颜色反应的底物使之进行酶催化反应。从颜色的变化上，可以判断固相载体上是否连上了HRP、是否有杂交体存在。如果发生了颜色变化，说明扩增出了特异片段，检测结果为阳性；如果没有颜色变化，说明原标本中不存在病原体DNA，检测结果为阴性。只要有合适序列的探针，该技术可以应用于一切基于DNA分子检测的科研与临床检测之中，范围十分广泛。