[00731453]用抑制性扣除杂交技术分离克隆油菜抗菌核病基因

以抗（耐）菌核病显著强于中油821的中R-888、宁RS-1作供体亲本，中油821作受体亲本和回交亲本创建了甘蓝型油菜抗（耐）菌核病的近等基因系。用cDNA-AFLP技术方法分析近等基因系受菌核病菌侵染后特异的表达条带；对获得差异片断的其中14个cDNA片断进行验证和克隆测序，BLAST程序进行相似性分析。从分析后的片断中选择两条序列片断进行重点分析。第一条序列BLAST比对分析后，设计引物进行序列的延伸，已经拿到长度为1310bpDNA片断（富含亮氨酸拉链），进行半定量PCR分析，在近等基因系中的相对表达差异十分地明显，在轮回亲本中表达量较大，在回交后代中表达量相对较少。对另一条片段BLAST分析后，设计引物进行序列的延伸得到的延伸序列长度为1100bp左右。用软件分析，确定此序列为一未知蛋白质的编码序列。在进行同源性分析后发现此序列在近等基因系之间的同源性仅为89.9%，对酶切位点的分析后发现， MSE1酶切位点发生的缺失在轮回亲本中，而在回交后代中此酶切位点没有发生变化。