[00738605]日本血吸虫单克隆独特型抗体NP30用于诊断及抗病免疫的研究(血吸虫病NP30/短程抗体检测试剂盒的现场推广应用

该试剂盒采用单克隆抗体技术，制备出抗独特型抗体ＮＰ３０，ＮＰ３０是日本血吸虫肠相关抗原的内影像，可替代虫源抗原检测抗体。该试剂盒用于急性感染病人敏感性可达９５％以上，慢性轻度感染者可达７３％，特异性９０％。经卫生部专家咨询委员会组织的双盲测试，该试剂盒的诊断指标均已达到或超过经典抗体检测法ＳＥＡ／ＥＬＩＳＡ。而且操作简单、快速，适用于基层大规模普查和医院临床应用。ＮＰ３０检测的抗体是短程抗体，治疗后一年阴转率达１００％，疗效考核价值与循环抗原检测相同，明显高于经典抗体检测法。该试剂盒用微量，仅需１０～２０μ １血清或全血，半小时内即可判读结果。该产品有效期为半年（４℃）。该试剂盒可用于现场大规模普查，确定化疗靶人群，也可用于临床血吸虫病的辅助诊断。日本血吸虫单克隆抗独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄ）ＮＰ３０的建株及鉴定。“七五”期间，该室承担了国家攻关项目“血吸虫病新型诊断技术的探讨”，建立了单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０，经鉴定其抗体同型为ＩｇＭ，系日本血吸虫肠相关抗原（ＧＡＡ）的内影象，与可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）有部分交叉反应。ＮＰ３０的建株采用感染日本血吸虫一年半的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０融合，用多克隆抗ＧＡＡ免疫血清筛选出，该创新途径为国内外首次报道，极大地提高了获得目标ａｎｔｉ－ｉｄ的机率，成为该研究一个技术特点。ＮＰ３０用于血吸虫病诊断的研究。证明ＮＰ３０能替代虫源抗原，用于血吸虫病抗体检测。用ＮＰ３０和ＧＡＡ、ＳＥＡ分别包板，用经典ＥＬＩＳＡ抗体检测法检测。结果证实：ＮＰ３０对急性血吸虫感染的检出率为９５％，与ＧＡＡ的９２％、ＳＥＡ的９７％无显著差异。对慢性感染，ＮＰ３０的检出率和ＧＡＡ的相同，为７３％，比ＳＥＡ和９４％低。证实ＮＰ３０检测血清抗体的能力与ＧＡＡ基本一致，可用于血吸虫病诊断。建立了三种抗体检测方法：Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ直接法、ＥＬＩＳＡ经典法和ＦＡＳＴ－ＥＬＩＳＡ夹心法。证明ＮＰ３０检测的抗体是短寿命抗体，血吸虫病治疗后一年的阴转率达１００％，具有流行病学意义上的疗效考核价值，明显高于经典抗体检测方法，与循环抗原检测结果相似，可为考核化疗效果和来年化疗靶人群的确定提供诊断学依据。研制出ＮＰ３０／抗体检测试剂盒。已制定生产流程，质量控制标准。经破坏性试验确定该试剂盒效价达半年。在１９９５年“全国血吸虫病免疫诊断方法考核研讨会”上获得卫生部专家咨询委员会组织的专家评审组认可，推荐上市试用。建立了对检测系统评估疗效考核价值的数学公式，用治疗后阴转率正值ｔ表示。对检测系统的敏感性、特异性、似然比和诊断效能分析均已有公式计算，但目前尚未见对一检测系统疗效考核价值的计算公式，由于现场工作难以采集到一个病人治疗前及治疗后不同时期的血清，因此该研究设计了一数学公式，计算治疗后阴转率校正值（ｔ）。如果已知一个检测系统的敏感性（Ｓｅ）、特异性（Ｓｐ），只需采集一次治疗后血清，获得血清学检测阴性人数（Ｎｒ），即可计算出治疗后阴转转率校正值ｔ。研制出ＥＬＩＳＡ简易读数仪（略）。ＮＰ３０对日本血吸虫虫卵肉芽肿致敏作用的研究（略）。