[00886154]角膜基质体外细胞培养及病毒学研究

国内眼科临床上主要应用的α1b滴眼剂联合其他抗病毒药物的治疗。以往的实验已证明α1b干扰素诱导细胞抗病毒作用比α2b低。目前未见两种干扰素对角膜细胞抗病毒作用的对比研究。为此，课题组从角膜基质细胞培养入手，首先建立眼角膜细胞体外培养的方法。 在建立了角膜细胞培养的方法后，进行了多种病毒对角膜基质细胞敏感性的研究，以及干扰素对角膜基质细胞抗病毒能力的研究。在实验的基础上，将实验结果应用于临床。一、兔角膜基质细胞体外培养：眼角膜细胞的培养技术在国内外已有报告，其培养方法也在不断改进。在以往的文献中角膜细胞培养多数采用细胞容易粘附的塑料培养板，培养基要求营养比较丰富的DMEM，F12等，并加胰岛素、生长因子、霍乱毒素等促进细胞生长的成分，方法繁琐。课题组采用组织块培养法培养兔角膜基质细胞。结果显示角膜基质细胞在培养瓶中培养2周以后可形成单层；24孔板培养3天后细胞贴壁生长旺盛，10天形成单层。角膜基质细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上角膜基质细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。结果表明，应用RPMI 1640培养基、采用玻璃瓶培养、不加特殊营养及促生长因子成分也使角膜基质细胞的组织块培养获得了成功。该实验方法更为简便可行。该实验结果还证明了角膜基质细胞的细胞形态在玻璃培养瓶和24孔塑料板培养两者没有明显差异，但是24孔板培养时细胞更容易粘附和伸展。二、兔角膜基质细胞培养及对病毒敏感性的实验研究：为研究体外培养兔角膜基质细胞对病毒的敏感性，采用微量细胞病变法，观察体外培养的兔角膜基质细胞对Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ)、腺病毒3型(Ad3)、滤疱性口腔炎病毒(VSV)等4种病毒的敏感性。结果显示，与对照敏感细胞比较：兔角膜基质细胞对HSV-1、HSV-2均敏感，对VSV、Ad3不敏感。HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ两者对体外培养角膜基质细胞敏感性相同，但是两种病毒引起的角膜炎临床表现及预后有明显的差异，这进一步证实了它们在致病机制上存在不同。Ad是DNA病毒，包括Ad3在内的多个血清型均可引起结膜炎，并可引起不同程度的角膜病变，但主要局限在角膜上皮。研究结果表明腺病毒对角膜基质细胞不敏感，这与临床表现是一致的。三、α2b干扰素对体外培养兔角膜基质细胞抗单纯疱疹Ⅰ型病毒实验研究：为研究α2b干扰素对体外培养兔角膜基质细胞抗单纯疱疹病毒的作用，采用微量细胞病变法，观察α2b干扰素在体外培养的兔角膜基质细胞上的抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的作用。24小时5u、50u、500u IFNα2b分别可以抗8、32、64 TCID50的HSV-Ⅰ型病毒感染。48小时5u、50u、500u IFNα2b分别可以抗16、64、528 TCID50的HSV-Ⅰ型病毒感染。Α2b干扰素对体外培养兔角膜基质细胞具有明显抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的作用。四、α1b、α2b型干扰素滴眼剂治疗单纯疱疹病毒性角膜炎临床对比研究：对比研究α1b、α2b干扰素治疗单纯疱疹病毒角膜炎的疗效。 46例单纯疱疹病毒性角膜炎患者随机分为两组，A组(29例29眼)滴IFNα1b眼液(滴宁眼液)，B组(17例17眼)滴IFNα2b眼液(安达芬)。结果显示角膜溃疡平均愈合时间：A组12.872.12天，B组9.453.04天(P<0.01)。IFNα2b治疗单纯疱疹病毒性角膜炎与IFNα1b相比疗效好。