[00890506]高效酪酸芽孢杆菌微生态饲料添加剂的研制

该项目利用酪酸菌与乳杆菌具有的共生、互生原理，菌种经多次驯化选育耐酸、耐碱、耐高温的优良菌种，采用“二联五步多相发酵”(专利技术)，使活菌发酵指数由单株2.0×109CFU/g，达到1.0×1010CFU/g，提高了5倍。并且简化了生产工艺，降低了成本。然后对该产品进行毒理试验、饲养试验、热敏和药敏试验。证明了该产品是一种安全的饲料添加剂。该研究主要菌群选择酪酸芽孢杆菌是基于(1)酪酸芽孢杆菌作为人类医药和保健品应用多年；(2)高度的生物学稳定性，正常情况下以内生芽孢形式存在，处于休眠状态，性质极其稳定、耐酸、耐碱、耐高温、耐挤压，干燥状态下室温可保存三年，可顺利通过胃肠道，不会被胃酸和肠液所破坏，直接到达作用部位而发挥作用，这是其他一般微生态产品所不具备的。饲料厂的高温挤压、制粒、等极端条件几乎不受影响；(3)预防和治疗畜禽，各种肠道感染酪酸菌和乳酸菌为专性厌氧杆菌，到达肠道后20min，几乎100%复活，生长速度极快。在繁殖过程中，能产生酪酸、乳酸、醋酸、细菌素等物质，通过竞争占位，如出血性大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、李氏杆菌以及黄金色葡萄球菌等，从而达到预防疾病的作用；(4)酪酸芽孢杆菌是一种新型活的生物双歧因子，其发酵提取物对双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪链球菌等肠道益生菌有增殖共生关系；(5)可与多种抗生素同用酪酸杆菌由于其独特的代谢方式，临床上可与多种抗生素同用，是国内外报道的唯一可与抗生素同用的益生菌，这一点在饲料畜牧行业抗生素普遍存在的情况下具有重要意义。具体研究内容第一步，制作含酪酸菌和嗜酸乳杆菌的混合菌液，制作含酪酸菌和嗜酸乳杆菌的混合菌液具体为，将菌液浓度均为1.0×108CFU/ml的酪酸菌和嗜酸乳杆菌按11的体积比，分别摇床培养、增值培养、种子罐培养、合并后成为混合菌液。第二步，选择对双方都适宜的联合培养基，制作联合培养基具体为在每100克蒸馏水中含葡萄糖1%、胰蛋白胨1%、酵母膏0.5%、牛肉浸膏0.3%、氯化钠0.2%、硫酸铵0.1%、磷酸氢二钾0.4%、硫酸亚铁0.1%、硫酸锰0.02%，碳酸氢钠0.1%、碳酸钙0.1%、Tween.800.02%，121℃流通蒸汽灭菌30分钟，凉至室温。第三步，将步骤1的混合菌液按150的体积比加入到步骤2的联合培养基中，联合培养基放置在大发酵罐中，用10%稀盐酸或5%氨水调控初始pH在7.0-7.4之间，搅拌5分钟，在37℃密闭厌氧发酵36小时后，取样检测活菌总数，保证在1.0×109-5.0×109CFU/ml，观察菌体生长情况，以菌体粗壮、生长良好为标准，用酸度计检测pH值，保证在4.0-3.5之间。第四步，开启搅拌泵，按发酵液总体积的5%加入药用碳酸钙(吸附剂)，搅拌，经告诉离心机离心，收集菌泥，在40℃以下通风干燥，水分控制在5%，粉碎过100目钢筛。第五步，检验合格后，成品一次性包装入库。