[00903935]猪重要传染病新型疫苗的创制与应用

中国是世界第一生猪生产与消费国，生猪产业是该省农业经济的重要支撑。该项目针对严重威胁中国生猪产业健康发展的猪蓝耳病等重要病毒性免疫抑制病和猪支原体肺炎等呼吸道细菌病，开展防控技术和产品研究，在国家863计划等项目支持下，历经12年科技攻关，取得了系列创新性成果。 一、国内首次确诊欧洲型和类NADC30美洲型猪蓝耳病并解析病毒分子特征；率先创制高致病性猪蓝耳病耐热保护剂活疫苗和猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗，为猪病毒性免疫抑制病的防控提供了有力支撑。(1)通过基因组序列分析，确认中国新发流行的欧洲型和类NADC30猪蓝耳病病毒(PRRSV)分别是由泛欧亚群和美国NADC30毒株演变而来，据此农业部增加了对种猪场欧洲型PRRSV的监测，为中国科学防控PRRSV提供了理论依据。(2)在国内首次应用微载体细胞悬浮培养技术培养PRRSV，实现了1000L生物反应器培养，病毒含量达传统转瓶工艺的10倍以上；创建耐热保护剂真空干燥工艺，实现产品在2-8℃条件下长期稳定保存，突破了传统产品依赖-20℃保存的限制，创制出首个高致病性猪蓝耳病耐热保护剂活疫苗。(3)应用大肠杆菌偏嗜密码子优化、表达载体启动子区和复制区改造、工程菌内毒素合成通路基因突变、蛋白纯化、病毒样颗粒(VLPs)结构解析等关键技术，实现了猪圆环病毒2型Cap蛋白可溶性表达，其表达量占菌体总蛋白30％以上，蛋白纯度达95％以上，VLPs组装效率达99％以上，经结构解析发现VLPs与天然病毒结构相同，创建了VLPs疫苗的创新技术平台，创制出国内首个猪圆环病毒2型病毒样颗粒疫苗，促进了动物疫苗产业技术升级。 二、国内首创水佐剂副猪嗜血杆菌病灭活疫苗、一针型水佐剂猪肺炎支原体灭活疫苗和猪萎缩性鼻炎基因工程亚单位疫苗，为猪呼吸道细菌病的防控提供了技术保障，产品推广应用改变了依赖抗生素防控猪呼吸道细菌病的局面。(1)通过对全国大型猪场进行流行病学调查，明确血清4型和5型是主要血清型；通过培养基筛选设计及发酵工艺优化，实现1000L规模发酵活菌数达现有技术的3～4倍；结合研制的高分子聚合物纳米颗粒水佐剂，创制出国内首个水佐剂副猪嗜血杆菌病灭活疫苗。(2)通过优势菌株筛选技术获得优势支原体菌株HN0613株；建立平衡溶氧传递系数(KLa)与动态pH培养环境相结合的工艺技术，实现700L发酵条件下，支原体培养密度达国内水平的10～100倍。结合水佐剂技术，创制国内首个水佐剂猪支原体肺炎灭活疫苗，1次免疫即可保护整个饲养周期。(3)采用猪支气管败血波氏杆菌(Bb)和产毒素多杀性巴氏杆菌(PM)共同感染模式，国内率先建立猪萎缩性鼻炎疫苗评价模型；通过基因工程表达技术和动物试验评价，发现了免疫保护效果最优的PM毒素蛋白(PMT)结合结构域肽段和细胞毒性激活结构域肽段抗原组合。在国内率先创制含有Bb和重组表达PMT蛋白两种抗原的猪萎缩性鼻炎基因工程亚单位疫苗。上述3种猪重要呼吸道细菌病疫苗的推广应用可大大减少抗生素的使用，保障了中国养猪业健康发展和猪源食品安全。 该成果获授权国家发明专利18项；获国家新兽药证书2项、生产批准文号6个；发表学术论文33篇(英文27篇)、出版专著1部。成果在全国27个省份推广8年，共计应用疫苗6.99亿头份，累计实现销售额7.66亿元，总经济效益达562.02亿元，经济和社会效益显著。