[00911523]双水相萃取技术分离纯化蛋白质的研究

液－液萃取技术是化学工业中普遍采用的分离技术之一，在生物化工中也有广泛的应用。然而，大部分生物物质是有生物活性的，需要在低温或室温条件下进行分离纯化，而采用传统萃取技术无法完成。双水相萃取就是考虑到这种现状，基于液－液萃取理论并考虑保持生物活性所开发的一种新型液－液萃取分离技术。 　　与传统的液－液分离方法相比，双水相萃取技术分离纯化蛋白质具有以下优势：体系含水量高，可达80%以上；蛋白质在其中不易变性；界面张力远远低于水－有机溶剂两相体系的界面张力，有助于强化相际间的质量传递；分相时间短，一般只需5～15min；易于放大和进行连续性操作；萃取环境温和，生物相容性高；聚合物对蛋白质的结构有稳定和保护作用等。正是由于双水相萃取技术的诸多优势，现已被广泛用于蛋白质、核酸、氨基酸、多肽、细胞器等产品的分离和纯化。 　　双水相萃取原理： 　　双水相体系是指某些高聚物之间或高聚物与无机盐之间，在水中以适当的浓度溶解后形成的互不相溶的两相或多相水相体系。高聚物－高聚物－水体系主要依靠高聚物之间的不容性，即高聚物分子的空间阻碍作用，促使其分相；高聚物－盐－水体系一般认为是盐析作用的结果。 　　双水相萃取与水－有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配，不同之处在于萃取体系的性质差异。当生物物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的存在和环境的影响，使其在上、下相中的浓度不同。分配系数K等于两相中生物物质的浓度比，由于蛋白质的K值不相同(大致在011～10之间)，因而双水相体系对各类蛋白质的分配具有较好的选择性。