[00930383]食用菌基因工程研究

①课题来源：（1）国家自然科学基金“抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究”（39960050）、“草菇冷冻胁迫诱导表达基因及其启动子的克隆分离”（30060054）、“食用菌外源基因表达系统的建立”（30371000）、“转基因草菇非期望效应及其产生的分子机理研究”（30871768）；（2）广东省自然科学基金“转基因耐寒草菇营养特性及非期望效应研究”（5006680）、“食用菌外源基因表达系统的建立”（032239）；（3）广东省科技计划项目“灵芝功能基因组学研究”（2003C31207）、“无抗性标记基因耐寒转基因草菇的研究与开发”（2004B20101001）。②研究目的和意义：食用菌营养丰富、美味可食是天然的健康食品保健食品。开展食用菌基因工程研究有独特的优势：1）食用菌安全无毒，具备作为外源基因表达宿主的安全性；2）食用菌是高等的真核生物，表达来自高等生物的基因，其产物能够保持天然产物的空间构型，产物活性高；3）食用菌不仅可以利用发酵罐进行大规模的深层发酵培养，也可以利用农林废弃物进行工厂化生产；4）食用菌有很好的蛋白分泌能力，表达的产物易于纯化；同时，开展食用菌基因工程研究有利于有目的地改良食用菌的性状。因此开展食用菌基因工程的研究具有重要的科学理论意义及实际应用价值。③主要论点和论据：根据食用菌的特点，克隆食用菌内源启动子等表达元件、克隆目的基因、建立筛选体系、建立转化体系、建立外源基因高效表达培养体系。④创见与创新：1）国内率先分别从香菇、草菇、银耳、灵芝、灰树花、金针菇中克隆了食用菌内源强启动子；2）克隆获得了4个灵芝免疫调节蛋白基因、多功能纤维素酶基因、抗冷冻蛋白基因、草菇冷诱导表达基因片段等目的基因，技术达到国际水平；3）国内外首先建立了草菇无抗性标记的筛选体系及银耳芽孢、白灵菇等的筛选系统；4）国内外首先建立了银耳芽孢完整细胞电击转化系统、草菇农杆菌介导的遗传转化体系和基因枪转化体系、白灵菇遗传转化体系；5）首次获得了抗寒及生物转化率高的草菇工程菌株、表达多功能纤维素酶和灵芝免疫调节蛋白基因的灰盖鬼伞工程菌株和银耳芽孢工程菌株。⑤社会经济效益，存在的问题：本成果为基础性研究，尚未产生实际意义上的经济效益。