[00955560]乙肝病毒基因在人早期胚胎中的复制和表达

1.目的：探索乙肝病毒通过生殖细胞垂直传递的可能性。2.方法与结果：①建立人精子/金黄地鼠卵体外受精模型，应用PCR、Southern、Dot、FISH技术，对取自60例乙肝患者的精样进行筛选，发现19例精样HBV DNA检测结果阳性。首次提供了HBV DNA在人精子染色体上整合的直接证据。应用FISH、RT-PCR证实由人精子带入卵中的HBV S、X和pre-C/C基因能够在早期胚胎细胞中复制与表达。②建立金黄地鼠精子/卵体外受精模型，应用FISH、RT-PCR，证实由精子带入卵中的HBV X基因能够在早期胚胎细胞中复制与转录；并用免疫荧光检测到HBsAg的阳性表达。③将PBR322-HBV DNA重组质粒分别注射到雄性小鼠睾丸与雌性小鼠卵巢内，再将其分别与正常雌性与雄性小鼠交配，取其胚胎用FISH、RT-PCR和免疫荧光检测，证实HBV DNA能通过精子质膜和卵透明带，整合到精、卵基因组和染色体上，精子和卵子携带的HBV基因能够在早期胚胎细胞中复制、转录和翻译。3.结论：本研究为HBV可经过雄性和雌性生殖细胞垂直传递提供了直接的科学证据；为在其他病毒性传染病中进行类似研究提供了理想的实验模型，进而有可能为临床医学基础研究展开一个新的领域。