[00993549]实时环介导等温扩增技术检测婴幼儿奶粉中肺炎克雷伯菌的研究

利用实时荧光监测仪将荧光染料（SYBRGreenI）与环介导等温扩增技术（LAMP）相结合，分析目的基因的扩增效率，以证实是否发生了LAMP反应，从而建立一种实时荧光环介导等温扩增技术（LAMP）检测肺炎克雷伯氏菌方法。首先确定了肺炎克雷伯氏菌的特异性ophE基因为靶基因，设计引物通过对引物浓度、内引物和外引物的最佳浓度比、模板浓度、dNTP浓度、BstDNA聚合酶用量、Mg2+浓度等条件进行优化，建立了婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌的实时环介导等温扩增快速检测方法。在此基础上采用试剂盒法提取人工污染的婴幼儿奶粉中的模板DNA，采用荧光定量环介导等温扩增快速检测婴儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌，其检出限为79CFU/mL，从样品处理到报告结果，耗时1h，灵敏度是PCR方法的100倍。此外还对从奶粉中提取肺炎克雷伯菌模板的4种提取方法进行了比较，确定了试剂盒法不仅节约时间，而且提取的基因组DNA较完整，保存时间长。在多家相关技术部门及企业进行应用，具有简单、快速、便宜，易于在基层食品检测部门、医院及相关食品企业推广，产生了明显的经济效益和社会效益，应用前景广阔。