[01180913]基于酿酒酵母表面展示技术的环境友好型F18+大肠杆菌病的防制技术

本成果来源于由“基于酵母展示技术的猪水肿病口服活疫苗重组菌株的构建”（系湖北省教育厅组织由长江大学主持的）项目编号：O20091205（2009-2010） 大肠杆菌是猪场的常见菌,其中致病性的F18+菌毛大肠杆菌导致的仔猪水肿病及断奶仔猪腹泻造成的仔猪死亡及生产性能的下降给猪场带来损失巨大,日常抗生素的治疗及疫苗防控只能在一定程度减轻这种影响,其中抗生素的大量使用还会带来食品安全的问题,因此研究一项安全而有效的控制技术显得很有价值和意义。 对F18阳性大肠杆菌的三个重要抗原在酵母细胞壁的表面高效展示表达,免疫原性蛋白与酵母胞壁表面的免疫多糖共同增强动物的非特异性免疫力,激发特异性免疫力;同时集成养殖的生物安全控制技术,系统控制猪场大肠杆菌病的爆发,减少或者停止抗生素在猪场的使用,对酶解破壁分离干燥后的重组酿酒酵母细胞壁提取物进行常规营养成分分析,主要的营养成分为水分 5.4%、粗蛋白26.5%、粗灰分2.8%、甘露聚糖含量为25.6%、葡聚糖含量为39.3%。 显著提高哺乳母猪血清和初乳中免疫球蛋白的比例,血清中IgA、IgM、IgG浓度分别提高50.92%、79.23%、43.94%。 1、在F18+E. coli流行病学检测工具上则为空白,建立了FedF-ELISA血清学方法能够检测猪场F18+E. coli的流行情况。 2、采用多拷贝高效表达技术获得重组质粒pHBM368AC-LSF,将菌毛抗原基因和毒素抗原基因结合在一起,克服单一表达量低,维持时间段的问题。 3、将重组质粒表达到酿酒酵母细胞壁的表面,获得重组酿酒酵母菌株SE-3E 由于酵母是安全生物,使其在制药工业和食品工业中得到广泛的应用,酵母表达系统是目前应用比较成熟的一项技术,酵母的培养比较简单,工业化生产的技术也比较成熟,因此,来源于酵母细胞壁的免疫多糖的应用前景比较广阔。 目前研究结果显示F18+大肠杆菌只在猪场发生,因此本成果应用主要在养猪领域类使用用较好效果。 我们获得高效表达融合的目的基因中不含细菌来源,启动子的基因中不含细菌来源,启动子 GAL1 ,展示元件 AC、rDNA rDNArDNA、URA3 URA3 及 CYC1TTCYC1TTCYC1TTCYC1TT CYC1TT都是来源于酿酒酵母,安全无毒。 本研究成果对 F18 菌毛大肠杆的防制有比较明显效果,减少抗生素使用。在两个1000多头的仔猪试验中应用效果显著,断奶存活率提高13～16%,生长期提高3～4%;平均每头猪降低药物保健费用26-33元,平均日增重提高12～14克/天。 但对重组酿酒酵母菌株 SE -3E 的纯化培养及生物学特性还有待进一步研究,的纯化培养及生物学特性还有待进一步研究,对细胞壁提取物的 程度和功能成分析也还需要更致研究,大范围对细胞壁提取物的 程度和功能成分析也还需要更致研究,大范围应用效果还需要进行比较详细的评估,以期达到在实践中大减少甚至完全 应用效果还需要进行比较详细的评估,以期达到在实践中大减少甚至完全 取消抗生素的使用,这对将来无食品产、保障人民健康整个养殖行业 取消抗生素的使用,这对将来无食品产、保障人民健康整个养殖行业 取消抗生素的使用,这对将来无食品产、保障人民健康整个养殖行业 取消抗生素的使用,这对将来无食品产、保障人民健康整个养殖行业 的发展都将带来巨大帮助。