[01208658]蔬菜及肉类药物残留快速检测技术——兽药残留

本项目以食品中常见违禁兽克伦特罗、已烯雌酚和恩诺沙星为对象,开展了快速免疫检测技术及产品开发研究,项目完成情况如下： （1） 首次在国内自主研制克伦特罗快速检测试纸条及ELISA试剂盒,其中ELISA试剂盒已通过广东省科技厅组织的科技成果鉴定（粤科鉴字[2006]254号）,在此基础上,进一步优化前期已开发的克伦特罗ELISA试剂盒的性能参数,检测限从0.1 ng/mL提高到0.05 ng/mL;检测时间进一步缩短,仅需25～30min;试剂盒准确率进一步提高,样品添加回收率达85%～110%,批内变异系数＜10%,批间变异系数＜15%;组织样品无需特殊前处理,采用沸水直接提取,简便可靠。开发了克伦特罗GICA试纸条,灵敏度可达1.0～3.0ng/mL,结果准确可靠,常温下保存期为18个月。 （2） 合成了己烯雌酚人工包被原与免疫原,用常规技术制备出了己烯雌酚的单抗和多抗,用多克隆抗血清初步建立了检测己烯雌酚的间接竞争ELISA法,该方法与同样是人工合成二苯乙烯类雌激素药物HEX的交叉反应率为8.5%,DIEN为38.5%,而与天然雌激素类药物E2和EE2以及Tyr几乎无交叉反应。平均批内变异系数为5.6%,平均批间变异系数为7. 7%;以此同时应用辛酸-硫酸铵沉淀法和传统硫酸铵沉淀法对小鼠腹水单抗和细胞上清单抗进行纯化及鉴定,将纯化后的抗体连接到活化的CNBr琼脂糖凝胶上,测得柱相关参数,制备出抗DES单抗免疫亲和柱。建立了IAC－HPLC联用方法。对空白组织样品进行添加回收率实验,回收率为63.67～67.63%,线性范围为33.33μg/kg～166.67μg/kg,变异系数为2.80～8.66％。检测限为22.22μg/kg,定量限为33.33μg/kg。 建立了IAC－GC-MS联用方法。对空白组织样品进行添加回收率实验,回收率为54.14～67.3％,线性范围为0.67μg/kg～10μg/kg,变异系数为4.41～16.15％,检测限为0.33μg/kg,定量限为0.67μg/kg。 （3）建立了恩诺沙星直接竞争ELISA法,其灵敏度LLD为0.07±0.08 ng/mL,标准曲线为IC50为0.63 ng/mL,线性范围（IC20IC80）0.08~6.03 ng/mL。按所得方法组建恩诺沙星ELISA检测试剂盒,并对试剂盒性能参数进行评价。恩诺沙星抗体特异性好,对结构类似物无明显交叉反应。以鸡肉、鱼肉、虾肉、猪肉、牛奶、猪肝为检测对象,结果表明样品基质对检测无显著影响。各样品添加回收率均在80%~120%之间,LOD为0.55~1.96 ng/g,LOQ为1.23~4.57 ng/g,确定限CCα在12.47~13.77 ng/g范围内,检测容量CCβ在15.60~16.83 ng/g之间。试剂盒内的试剂可在4 ℃保存1年,具有良好的稳定性,且板内变异系数、板间变异系数、日间变异系数及样品检测批间和批内变异系数均满足酶联免疫试剂盒的技术要求。将研制的恩诺沙星试剂盒与HPLC法作比对,进行相关性和符合度分析,表明所建立的ELISA和HPLC法相关性和符合度好。