[01841189]固定化乳酸菌透性化细胞发酵生产cis9,trans11-共轭亚油酸

本课题在前期的研究中成功筛选到一株能生产c9,t11-CLA的乳酸菌（瑞士乳杆菌L7）,并建立了生物转化方法。由于乳酸菌等微生物的亚油酸异构酶是胞内酶,存在细胞壁和膜对底物和反应产物的通透屏障,造成生物转化效率低、反应时间长的问题。因此,我们提出采用渗透处理细胞技术获得透性化细胞,使亚油酸和CLA能够自由进出细胞,从而提高菌体亚油酸异构酶的表观活力;同时采用包埋法对乳酸菌透性化细胞进行固定化,使菌体和产物易于分离,并且菌体可以重复多次使用,提高c9,t11-CLA生产水平和效率的研究。 通过研究,得到如下结果： 1、瑞士乳杆菌L7（Lactobacillus helveticus L7）洗涤菌体生物转化合成c9,t11-CLA的能力和分批发酵相近,可以继续进行细胞透性化、固定化发酵的研究,洗涤菌体合成c9,t11-CLA的最优条件为PBS缓冲液pH5.8、缓冲液浓度0.05mol/L、亚油酸浓度为1.000mg/mL、反应温度23℃、反应时间为12h,最优条件下的c9,t11-CLA产量为0.540mg/mL。 2、菌体经30﹪的乙醇在37℃透性化处理15min,亚油酸异构酶的表观酶活增加了55.7﹪。 3、透性化菌体经1.75﹪海藻酸钠包埋,在2﹪氯化钙溶液老化3h,制得固定化胶珠。经固定化后,c9,t11-CLA产量为685μg/mL,每批次的发酵时间为15h,远小于传统发酵所需的36h。固定化透性化菌体重复使用5次仍具有较高的转化效率。 4、固定化胶珠有许多错综复杂的孔隙,孔径大小为5～10μm,亚油酸微粒大小为0.1μm左右,胶珠的多孔结构满足了反应过程中物质的传递。 5、固定化瑞士乳杆菌L7透性化细胞发酵生产c9,t11-CLA技术可行,可以节约生产成本,增加企业的经济效益。