[00363635]利用整合型重组枯草芽孢杆菌高效生产普鲁兰酶

课题来源：南宁邦尔克生物技术有限责任公司、广西科学院，利用具备技术人才以及在生物工程产业化经验，通过分子改造技术获得性能更优越的普鲁兰酶基因，克隆整合到枯草芽孢杆菌基因组中，获得整合型重组普鲁兰酶表达菌株，优化发酵表达条件以及后提取效率，建设高产普鲁兰酶生产技术产业化示范。获广西科学研究与技术开发计划的立项和经费支持（项目编号：桂科重1348004-2）。技术原理和性能指标：通过普鲁兰酶的分子改造，普鲁兰酶在枯草芽孢杆菌中的整合表达，普鲁兰酶的中试生产及应用研究，和新普鲁兰酶产生菌的筛选以及新普鲁兰酶基因的克隆表达，优化微滤、超滤等后提取工艺，建立成套高活力、高产普鲁兰酶生产技术产业化示范。加速科技成果向现实生产的转化。性能指标：构建整合型枯草芽孢杆菌表达系统，重组菌发酵产普鲁兰酶活力达到1400U/ml以上；生产出普鲁兰酶产品30吨 ，产品符合公司企业标准，其主要指标：酶活力≥3000U/ml，菌落总数≤1000cfu/ml。与国内外同类技术比较：该项目已成功通过分子改造获得了性能更优异的普鲁兰酶，获得了能高效生产普鲁兰酶的重组整合菌株，并生产出产品推向市场。 项目在多个技术和工艺技术成果达到国内领先水平。成果的创造性、先进性：该项目已获得4项技术发明达到国内领先国际先进水平。申请4件发明专利，有1件已经获得授权。直接经济效益和社会意义：成果转化生产普鲁兰酶30吨，经用户验证，酶制剂的实际使用效果良好。产值500万元，利润90万元。为科研技术成果转化发展成产业做了有益探索，提高中国普鲁兰酶研究水平打破国外公司的垄断，提高企业和产品竞争力，得到可持续快速发展。推广应用的范围、条件和前景以及存在的问题和改进意见：该项目不仅可以解决高性能普鲁兰酶的开发和高效生产问题，通过该项目建立起来的酶分子改造共性技术可以为其它种类酶的改造提供有意义的指导。项目的实施，完成普鲁兰酶新产品的技术开发，产生了巨大的社会效益并且具有推广的价值：采用的整合型枯草芽孢杆菌表达系统拥有自主知识产权的技术，在国内处于技术领先地位；在高密度发酵高效整合表达外源基因时，可免除抗生素的使用，避免终产品中抗生素的残留，对食品和药品用重组蛋白质的生产提供了一条绿色途径，为进一步开发更多蛋白质产品打下了良好的技术基础。 普鲁兰酶产品的研发成功，是中国生物工程产品的又一重要创新成果，将打破该产品全部由进口产品垄断的局面，满足国内啤酒、淀粉糖、麦芽糖醇等行业的需求，促进酶制剂行业的技术进步。该项目成果提高企业和产品竞争力，促进广西生物产业可持续快速发展。项目开发与培养人才相结合，培养了一支具有高素质微生物发酵、酶催化反应、大分子物质分离纯化工程化能力的中试技术骨干为人才引进与培养树立了榜样，起到良好的示范和带动作用。